中医针灸治疗原发性三叉神经痛56例临床疗效观察_临床医学论文二十篇
中医针灸治疗原发性三叉神经痛56例临床疗效观察_临床医学论文二十篇
【医药论文】导语，大家眼前所阅览的这篇共有81936文字，由马荣新潜心修订，上传到美文档(meiword.com)！细胞（英文名：cell）并没有统一的定义，比较普遍的提法是：细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。中医针灸治疗原发性三叉神经痛56例临床疗效观察_临床医学论文二十篇感谢大家一起阅览，希望能帮到你！
第一篇 中医针灸治疗原发性三叉神经痛56例临床疗效观察_临床医学论文
三叉神经痛是一种临床上比较常见的主要表现为疼痛的典型症状疾病，又被称为痛性抽搐，主要的疼痛分布在三叉神经中的某支或者几支，发生急骤的剧烈闪电式局部疼痛，主要的临床表现为触电样、样、闪电样、刀割样、烧灼样的剧痛。其是现代医学上神经科的一种疑难病，多发于三叉神经的第二、三支。其中上下颌、面部、舌部表现的最明显。人们说话、饮食、洗脸等都可以引起该病的发作，对患者生活质量产生了严重的影响[1]。本研究主要是应用中医针灸治疗，取得了良好的临床效果，现总结报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 20xx年4月到20xx年9月我院收治的56例原发性三叉神经痛患者，男性29例，女性27例，年龄29-78岁，平均年龄43.3±6.2岁；病程最短的患者仅仅2天，有些患者病程长达13年，左侧疼痛27例，右侧29例。患者均经神经检查无感觉运动障碍，ct扫面或者mr扫描没有器质性病变。
1.2 分期辨证[4] 急性发作期：肝胆火盛，经气不畅，壅滞阳明，腑气不通；疼痛持续期：火热邪气损伤经脉，经脉阻塞，气滞血瘀；缓解期：经脉失养，气阴两虚，久病入络。
1.3 治疗方法
1.3.1 对照组 采用口服西药卡马西平治疗，3次/天，每次剂量200mg，1月为一个治疗疗程，在治疗1疗程后对其的治疗效果进行评估，对患者随访3月，观察患者的病情发展及不良反应的发生情况。wWW.meiword.CoM
1.3.2 观察组 采用中医针灸治疗方案，主要的穴位：神庭、风池、印堂、外关、合谷、完骨、天柱、人中，局部配穴：第一支痛选阳白、攒竹、头临泣、丝竹空，第二支痛选四百、太阳、上关，第三支痛选下关、地仓、大迎。选1.5-2.0寸28号毫针采用泻法，观察患者在施针之后显现出的麻、重、酸、触电样、胀感作为参考标准，1天施针一次，间隔行针2次，每次留置20min，一个疗程30次。各个穴位的进针注意深度和手法，治疗1个疗程，随访3月，观察患者的病情发展变化和不良反应的发生情况。
1.4 疗效评价 显效：患者疼痛彻底消失，基本恢复了面部等部位的感觉，随访期间未见复发；有效：疼痛基本上消失，随访期间没有复发，发作时间和治疗前相比较减少超过50%；无效：疼痛没有消失，发作的时间减少≤25%。显效率+有效率=总有效率。
2 结 果
观察组患者经过治疗后显效17例，有效18例，无效3例，出现不良反应症状的患者1例；对照组患者显效6例，有效9例，无效3例，不良反应表现患者4例，两组的临床治疗效果对比存在差异具有显著的统计学意义（p<0.05），结果见表1。
3 讨 论
3.1 原发性三叉神经痛是一种以疼痛为主的疾病，中医认为，此病症一般是因三阳经络受邪导致的，主要有外感和内伤两种方面的发病原因，常见是被风火两邪所引起的。外因主要是受到外邪的侵袭，人体头部是阳气的交汇之处，若其卫气不固而引起风寒或者风热，导致手足的三阳经络被侵袭，常常会引起经络的闭塞，不通则痛；内因主要是由于患者的情绪起伏不定引起的，风火上扰阳明经，筋脉痉挛，最终引起面部疼痛[2]。
3.2 在临床治疗过程中根据“以微针通其经络，调其气血”是“气至病所”来获得良好的治疗效果。针灸治疗主要是可直接作用在产生疼痛的三叉神经神经干，阻断其异常放电和疼痛的传导，还可以通过神经及体液的调节来改善局部血供的状况，发挥镇痛的效用。在治疗中要注意进针的角度及其深度，以得气为主[3]。
综上所述，临床上治疗三叉神经痛疾病中医针灸治疗比传统的西药治疗有着明显的优势，临床不良反应的发生少，安全性较高，值得临床上广泛的推广和普遍应用。
第二篇 运用中医中药治疗崩漏300例临床观察_临床医学论文
随着生活水平的不断提高，人们在工作的生活压力也在逐渐的增加以及生活环境的影响导致崩漏的发病率，呈逐年上升趋势。崩漏的治疗也得到了临床医生高度重视，近年来我院采用中医中药治疗崩漏取得了较好的效果，现将结果报告如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择我院20xx年1月-20xx年6月门诊就诊患者300例，年龄：20岁以下者28例，21-45岁者128例，45-60岁者44例。年龄最小者16岁，最大者60岁。病程最短者20天，最长者6年。其能性子宫出血有254例，药流及反复刮宫有24例。子宫黏膜下肌瘤者10例，带环出血有12例。在就诊前的所有病例均使用过人工周期及采取多种药物治疗，其中有大部分已婚患者都进行过刮宫术治疗，结果治疗因疗效不佳前来我院就诊。
1.2 诊断标准 月经频发：最短的有21天子宫有不规则出血的情况，正常月经之外的任何时候发生了子宫出血；月经过多：周期规则，但经量过多或经期延长；月经频多：血量过多，并且月经周期不规则。
1.3 辨证分型 阴虚血热型：素体阴虚，虚火内炽，冲任失约，扰动血海，所以经血非时妄行。症见：经血非时立刻而下，而经来先期，量多势急，或血色鲜红而质稠，量少淋漓，腰膝酸软，伴口干渴，舌红，苔薄黄，五心烦热，脉细数。痰湿阻滞型：冲任不固，脾伤气陷，统摄无权，均不能制约经血。症见：出血量大，且淋漓不尽，血经色淡红，而且伴随面色无光泽，气短懒言，平素带下量多，舌淡胖，胸膈满闷，边有齿痕。wWw.meiword.CoM气滞血瘀型：瘀血阻滞，血不归经。症见：经血量时大时小，非时而下，色紫黑有块，时下时止，舌质紫暗或有瘀点，苔薄白，少腹胀痛拒按，脉弦或涩。
1.4 治疗方法 基本药方：茜草炭15g，黄芪30g，山萸肉20g，女贞子15g，贯众炭15g，当归20g，旱莲草15g，丹参20g。如果出血势盛量多加仙鹤草30g，三七粉10g（冲），如果出血淋漓不断的患者可以加荆芥炭15g，生蒲黄15g（布包煎）。漏血不止，情况下夹瘀块者加红花10g，川芎10g。漏下不止，时断时续加升麻阿胶（烊化）10g，15g；生白术15g，痰湿盛者加怀山药15g，子宫肌瘤出血反复者发作者加莪术10g。血热重加生地榆10g，乌梅15g。服用方法：应当首先将药物用冷水浸泡40分钟左右，浸透后煎煮，首先煎用武火煮沸后文火煮30分钟，煎好后总量约为250-300ml。崩症的每4个小时服药1次，漏症的每8个小时服药1次，连续服用3个月经的周期。
2 疗效评估标准
痊愈：控制出血后，连续3个月经经期，血量都正常，血红蛋白在100g/l以上。或者围绝经期的妇女血止后绝经者。显效：控制出血过后，月经经期、血量基本都已经正常，但是经期仍然较长（7天以下），自觉症状基本消失，血红蛋白在100g/l以上。好转：月经经期、部分症状得到了明显的改善，血量有所减少，血红蛋白在90g/l以上。无效：以上各项均无改善。
3 治疗结果
在300例患者中，治愈175例，占58.3%。显效65例，占21.7%。好转35例，占11.7%。无效25例，占8.3%。总有效率为91.7%。
4 典型病例
林某某，女，20岁，学生，20xx年3月3日就诊，既往月经正常，今年元月，因经期过劳，而致经期紊乱，每隔10余天行经1次，先经水淋漓不断半月余，量多而色深红，夹有血块，伴头晕，烦热，小腹疼痛。诊见面色萎黄，精神疲惫。舌质紫暗，苔薄黄，脉弦细数。证属血热挟瘀，治宜清热凉血，化瘀止血。基本方加炒蒲黄（布包）、五灵脂各10g。3剂后出血明显减少，腹痛减轻，唯觉疲乏无力，原方加制首乌15g，怀山药20g。3剂后，诸症消失，随访至今月经正常。席某某，女，38岁，干部，20xx年年6月27日初诊，月经紊乱年余，量多，每次经治疗后血止，但下次来月经又出血不止，曾在某医院行诊刮术，仍反复不愈。诊时出血，量较多，淋漓不尽已20余天，色淡红而夹有血块，头晕，心悸，神疲乏力，气短懒言，纳呆。舌质淡黯，苔薄黄，脉沉细。证属气血两虚，挟有瘀热，治宜益气化瘀，滋阴清热。基本方加制首乌20g，阿胶（烊化）15g，鸡内金10g。5剂
后血止，精神见振。首方续服5剂，诸症痊愈。自此以后，月经周期正常。
5 讨 论
崩漏视为妇科常见多发病，均为于青春期和更年期妇女较多。较为多发临床应根据出血的量，质，色。结合其他症和舌，脉等进行辨证。生育期因胎产乳的影响，常处于肝血不足，容易伤血，气有余的状态。治疗时可以疏肝养肝；更年期气血皆虚，肾气衰，完全依赖后天水浴的滋养，治疗时应该不忘记兼补脾胃。但“五脏之伤，穷必及肾”，肝，脾，肾转变以肾虚为主，所以在调整月经周期时首先补肾是关键。崩漏的西医治疗主要是手术治疗以及激素治疗，考虑到了手术的损害和并发症以及激素的副作用，与中医药治疗相比较，病人首先选择中医，而且现代中医已具备了相当熟练的西医知识和手术技术，在中医药疗效不佳时并不排斥使用西医。随着对崩漏重症处理经验的日益丰富，以及中医高效、有效的成方剂型的日益增多，在治疗崩漏的优势上将更加突出，中医药在多环节治疗上将会具有更加明显的优势。
综上所述，采用中医中药治疗崩漏的治疗方法能有效的缓解崩漏的临床症状，增加了临床疗效，促进了患者痊愈，在治疗过程中，安全可靠，不良反应小，药物价格低廉，适宜临床推广应用。
第三篇 中医针灸治疗头痛78例临床观察_临床医学论文
头痛是患者自觉头部疼痛的一类病证。可见于多种急慢性疾病，如脑及眼、口鼻等头面部病变和许多全身性疾病均可出现头痛，其病因复杂，涉及面很广。头为“诸阳之会”、“清阳之府”，手、足三阳经和足厥阴肝经均上头面，督脉直接与脑府相联系，因此，各种外感及内伤因素导致头部经络功能失常、气血失调、脉络不通或脑窍失养等，均可导致头痛[1-2]。针灸学是以中医理论为，在继承和发扬古代针灸学术思想和宝贵实践经验基础上，运用传统与现代科学技术来研究经络、腧穴、治疗法则、作用机制的一门学问[3-4]。笔者20xx年5月-20xx年8月采用针灸治疗头痛患者78例，效果满意，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组头痛病例150例。其中男58例，女92例。年龄19-76岁，平均（48.5±9.6）岁。病程5天-4年。150例患者随机分为治疗组78例，对照组72例。治疗组采用针灸治疗，对照组采用西药治疗。两组患者在年龄、性别、病程等方面相比差异无统计学意义（p>0.05），具有可比性。
1.2 治疗方法 对照组患者口服罗通定（山西云鹏制药有限公司生产），每次30mg，一日3次；益脑宁（黑龙江新医圣制药有限责任公司生产），每次4片，一日3次。
治疗组患者在以下辨证分型的基础上采用针灸治疗。两组患者均治疗20d后进行疗效观察。
外感头痛：治法：祛风通络，止痛。WwW.meiword.coM以督脉及手太阴、足少阳经穴为主。主穴：列缺、百会、太阳、风池。配穴：阳明头痛加印堂/上星、攒竹、合谷、内庭；少阳头痛加率谷、外关、足临泣；太阳头痛加天柱、后溪、申脉；厥阴头痛加四神聪、太冲/行间、内关；风热头痛加曲池、大椎；风寒头痛加风门（拔火罐）；风湿头痛加头维、阴陵泉。
内伤头痛：实证本文由上文库收集治法：疏通经络，清利头窍。以督脉及足阳明、足少阳经穴为主。主穴：百会、头维、风池。配穴：按头痛部位配穴同上。肝阳上亢者，加太冲、太溪、侠溪；痰浊头痛者，加太阳、丰隆、阴陵泉；瘀血头痛者，加阿是穴、血海、膈俞、内关。
虚证。治法：疏通经络，滋养脑髓。以督脉及足阳明、足少阳经穴为主。主穴：百会、风池、足三里。配穴：按头痛部位配穴同上。血虚头痛者，加三阴交、肝俞、脾俞；肾虚头痛者，加太溪、肾俞、悬钟。
1.3 疗效判定标准 显效：治疗后患者症状完全消失，恢复如常；有效：治疗后患者症状明显减轻，但还有疼痛轻微；无效：治疗后患者症状无改善或虽有缓解但又反复发作。总有效率=（显效人数+有效人数）/总人数×100%。
1.4 统计学处理 采用spss13.0处理数据，χ2检验，p<0.05表示差异有统计学意义。
2 结 果
两组患者临床疗效见表1。治疗组总有效率为80.2%，观察组为91.0%，两组相比差异有统计学意义（p<0.05）。
3 讨 论
头痛是一个症状，发病原因很多，涉及的病种甚广。中医认为“头为诸阳之会”、“清阳之府”，这说明：第一，头部需充足的气血濡养，输送气血的通路应该通畅；第二，邪气易于循经侵袭。换言之，若气血充盈，升降如常，外无非时之感，内无病理产物，焉有头痛之疾？
头痛的辨证要分清外感，内伤；辨别虚实；区分部位。外感头痛多属实证，以风邪为主。内伤头痛有虚有实，实者为肝阳上亢、痰浊上蒙及瘀血阻络；虚者为肾虚与血虚。针灸治疗在辨证分型基础上结合循经选穴，处方以局部与远道相结合。根据证候虚实施行补泻[5-6]。
头痛可由多种疾病引起，有时是某些病加重的早期症状，如颅脑炎症、高血压脑病、颅内出血等，当病人除头痛外，还伴有恶心、呕吐、视力减退、肢体运动或感觉障碍等，应作必要的检查，如眼底检查、头颅x线摄片、脑血管造影、脑室造影、电子计算机断层扫描等，以便明确诊断，治疗原发病，采取有效的综合治疗措施。
针灸治疗头痛的效果与病种关系密切。外感头痛一般辨证不难，治疗也较容易。内伤头痛的针灸疗效可因病而异。针灸疗效较好的病种一般有高血压头痛、血管神经性头痛、神经衰弱头痛及部分五官科病症头痛。对上述病症，针灸不仅可使头痛减轻或立即止痛，经过一定疗程的治疗，多数病人可以治愈。针灸有效病例，不仅头痛缓解，而且睡眠、体力、食欲、胃肠功能等均可改善。总的说针灸治疗功能性头痛疗效较好。
第四篇 论中医临床疗效的提高探讨_临床医学论文
有些人总是担心如果中医对疾病的治疗效果不佳，必然会影响到中医的学术声誉，确实这是存在的。但是要如何提高中医临床的疗效，却各有各的见解，总结起来，一般有以下几点：第一，要加深中医自身学术功底的力度，争取达到精深的水准：这要结合对当前的中医临床实践进行观察，在中医人才培养中不断的加深中医的基本功功底，只有底子硬了，对中医临床疗效的提高才有保障。第二，要不断的进行实践，在临床实践中不断完善，在不断完善中进行创新：实践出真知，只有结合实际的临床情况，才能灵活的用药，才能有的放矢，才能有更好的疗效。第三，要有良好的职业道德，重视医德医风的培养，从而提高中医的疗效：作为中医临床医生，必须要有较高的医德医风，和一定的文化素质修养。中医药是具有中医特色的一门包含着深厚文化底蕴的医学科学，所以，对中医药文化的内涵进行研究和探讨将有利于激发爱国热情从而推动中医药发展的现代化。一个中国文化底蕴不足的人，是不可能成为一个高水准的中医的。
中医的基本理念和现代生命科学有着很多惊人的相似之处，比如中医中强调阴阳平衡，这与现代系统生物学有异曲同工之处，中医中强调天人合一，这与西方现代科学所要求的健康环境因素有着许多的相似之处，中医中强调辨证施治，在西方医学中是通过药物遗传学为每一位病人寻找到最适合自己病症的药物，中医中的复方论就是现在在西方治疗学中所强调的以各种疗法综合使用的治疗方法。
中国的中医学科已经出现了被边缘化的危机，这是现代一些中医医生对中医未来发展方向的近忧远虑。WWW.meiword.COM确实，在中医行业的市场中，已经出现了被压缩和被挤压的危机，特别是在西医的猛烈攻击之下，中医思维西医化将不可避免的导致科学结构的土崩瓦解，中医最终将会论文一种民间的技艺而已。思维是人的智力活动，在中医学可上，它是这一学科得以生存并发展的重要关键和唯一载体，所以，如果思维偏离或者放弃了其自身的学科方法思维路径来开展业务时，这个学科的根基已经完全动摇且已不保，支撑该学科存在和发展的学术支柱也就随之坍塌。在西医市场化迅速普及的状况下，中医学的根基岌岌可危，要让中医得以立足，必须认真的研究和探讨一下中医学未来发展的方向和方法。
要想提高中医的临床疗效，必须加强我们中医本身的基本功，同时还需要我们不断的进行充实自己，武装自己，汲取新的知识来为我所用。临诊的时候首先要以中医学术的思维来对病人进行珍视，使用中医的学术和方法来对病人进行观察，用四诊八纲来辩证，从而得出中医对该病人所患的疾病的认识，然后使用中医的学术思维来对该病症指定相应的治疗法则，选择适合的处方用药。我们在现实生活的医疗活动中，某一个病人的求医治病的过程中不可避免的可能会遇上中医的诊治和西医的诊治。我们在使用中医思维对病人的进行诊断的同时，我们不能排除排斥或否定其他学科的诊疗，我们可以将其作为对中医的一个补充，以弥补中医的不足之处。在现实的医疗活动中，一定要学会全面思考，无论是在治疗上还是诊断上，一定要有参考有主论，这是提高中医临床疗效必须要做到的，其最终目的都是为了病人能及时的康复。
第五篇 关节松动术结合中医推拿手法治疗膝关节 关节炎的临床分析_临床医学论文
关节松动术结合中医推拿手法治疗膝关节 关节炎的临床
目的：探讨关节松动术与中医推拿手法两者结合治疗膝关节骨膝关节炎的临床意义。方法：将我院收治的62例膝关节骨关节炎门诊及住院患者随机分为治疗组32例和对照组30例。对照组使用常规治疗，治疗组使用关节松动术结合中医推拿手法。结果：治疗组的前2组患者膝关节功能评分比较无显著性（p>0.05）治疗后两组评分与治疗前明显升高，但治疗组的总有效率（96.9%）明显高于对照组（76.7%）（p<0.055）结论：采用关节松动术结合中医推拿手法治疗膝关节骨性关节炎疗效显著值得推广。
膝关节骨性关节炎是指由于膝关节软骨变性，骨质增生而引起的一种慢性关节疾患，又称膝关节增生性关节炎，退行性关节炎及骨性关节病等，本病多发生于中老年人，也可发生青年人；可单侧发病，也可双侧发病，严重影响患者的生活质量。现回顾性我院采用关节松动术结合中医推拿手法治疗膝oa取得较好的疗效，现报道如下：
1.1一般资料。选取20xx年3月-20xx年5月我院收治的62例膝关节骨关节炎门诊及住院患者为研究对象，将患者随机分为治疗组32例和对照组30例。对照组中，男14例，女16例，年龄40-81岁，平均51.5±16.3岁，其中单膝发病12例，双膝18例，病程5个月-11年，平均7.6±2.8年；治疗组32例，男15例，女17例，年龄41-85岁，平均55.2±7.5岁其中单膝发病14例，双膝18例，病程10个月-10年，平均6.5±3.9年，年龄及病情方面差异无显著性（p>0.05）具有可比性。WWW.meiword.COm
1.2诊断标准参照中华医学会风湿病学分会20xx年制定的《骨关节炎诊治指南》中关于膝关节炎诊断标准[1]①近一个多月大多数时间有膝关节疼痛；②有骨摩擦音；③晨僵≤30min④年龄≥38岁；⑤有骨性膨大。满足1+2+3+4条，或1+2+5条者可诊断膝骨关节炎。临床+放射学标准；①近一个月大多数时间有膝痛；②x线片示骨赘形成；③关节液检查符合骨关节炎，④年龄≥40岁；⑤晨僵≤30min；⑥有骨摩擦音；满足1+2条，或1+3+5+6条，或1+4+5+6条者可诊断膝骨关节炎。
1.3治疗方法①一般治疗，指导健康的生活方式，注意休息，避免过度劳累，两组患者均给予美洛昔康7.5mg，1次d，服用半月。②对照组，病人取舒适放松。无痛的。治疗应靠近治疗的关节，一手固定关节的一端，一手松动另一端。手法运动方向；可以垂直或平行治疗平面。分离—垂直于治疗平面；滑动和长轴牵引一平行于治疗平面，手法平衡，有节奏，持续30秒—1分钟.总时间20分钟。③治疗组，采取关节松动术后，中频理疗仪照患者膝15min后采用推拿手法治疗，每次操作30分钟，隔日治疗1次。①取俯卧位，右手滚法于腘窝处，沿小腿后正中线，来回操作然后以推法肘按法，搓法放松小腿腓肠肌；②取仰卧位，左手托着关节腘窝部，用一指禅推拿在足三里穴、双侧膝眼穴，胆囊穴，绕关节肌群附着点放松理筋手法。伸屈关节，协调关节数遍，辅以旋展滚法，揉捻法与膝关节功能灵动性。
第六篇 浅析基质细胞衍生因子在哮喘小鼠气道中的表达_药学论文
【摘要】 目的观察基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor-1, sdf-1)在鸡卵清蛋白(ova)诱导小鼠哮喘模型中的表达，探索哮喘气道重塑的发生机制。方法40只雌性spf级c57bl/6小鼠，体重18～22g，随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法建立ova小鼠哮喘模型。两组动物于末次雾化结束后24h处死，取肺组织行病理切片，苏木精-伊红染色(he)观察肺脏的组织病理学变化;逆转录聚合酶链式反应(rt-pcr)、免疫印迹法(western blot)、免疫组织化学(immunohistochemistry, ih)技术检测肺组织sdf-1的表达。结果①哮喘组支气管上皮细胞脱落、气道壁增厚，细支气管和血管周围有大量炎细胞浸润;②哮喘组肺组织sdf-1在rt-pcr、western blot及ih中均为阳性表达，而对照组则否。结论小鼠哮喘时肺组织分泌大量细胞趋化因子sdf-1，可能是哮喘气道重塑的重要因素之一。
【关键词】基质细胞衍生因子;哮喘;气道重塑
abstract: objectiveto study the expression of stromal-derived factor-1 (sdf-1) in the airway of mice with allergic asthma induced by ovalbumin (ova) so as to explore the mechani of asthmatic airway remodeling.methodsforty female c57bl/6 mice of spf grade were randomly divided into asthma group and control group with 20 in each. mice were sensitized and challenged with ovalbumin to establish the asthmatic model. all the mice were killed 24 hours after the last aerosolisation. the paraffin embedded sections of lung tissues were stained with hematoxylin and eosin (he) for yzing pathological changes. sdf-1 mrna extracted from lung tissues was assessed by rt-pcr while sdf-1 protein extracted from lung tissues was assessed by western blot and immunohistochemistry (ih).results① after repeated allergen challenge, obvious infiltration of inflammatory cells and proliferation of goblet cells and ooth muscles appeared in mouse bronchi. ② according to rt-pcr and western blot and ih results, the expression of sdf-1 was positive in asthma group but negative in control group.conclusiona large amount of sdf-1 is secreted in the lung tissues in asthmatic mice, which may be one of the critical factors in asthmatic airway remodeling.
key words: stromal-derived factor-1; asthma; airway remodeling
支气管哮喘是一种慢性气道炎症，伴有气道高反应性和气道重塑，而气道重塑则是一个在慢性炎症基础上的异常损伤修复过程。wWW.meiword.Com基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor-1, sdf-1)是由基质细胞产生的一种cxc型趋化因子。近年来研究表明，基质细胞衍生因子对组织或器官的创伤、炎症损伤修复起到了重要的作用。但是，sdf-1与哮喘相关性的研究目前还未见报道，我们就此进行了探讨。
1材料与方法
1.1药品与试剂鸡卵清蛋白(ova)ⅴ级(美国gbico公司);氢氧化铝干粉(郑州派尼化学试剂公司);pbs(美国gbico公司);sdf-1兔抗小鼠一抗(武汉博士德生物有限公司);过氧化物酶标记羊抗兔二抗(美国dako公司);ecl发光液(碧云天公司);兔抗小鼠内参β-actin(博奥森公司);免疫组织化学试剂盒(美国dako公司)。
1.2方法
1.2.1哮喘模型的制备小鼠哮喘模型实验参考文献[1]，略有变动。实验动物为40只雌性spf级c57bl/6小鼠(第四军医大学动物中心提供)，体重18～22g，随机分为哮喘组和对照组。按照文献方法[1]构建哮喘模型：0、7、14d于小鼠腹腔内注射致敏液0.2ml/只(致敏液为每0.2ml pbs溶液内含10μg ova、20μg氢氧化铝)。于第21天开始0.5g/l浓度的ova生理盐水溶液雾化，每次30min，隔日1次，共计18次。对照组用空白pbs及生理盐水，余同模型组。两组动物于雾化结束后24h处死，取右肺于40g/l甲醛溶液中固定，石蜡包埋，用于病理观察及免疫组织化学(ih)检测;取左肺于液氮中保存，用于rt-pcr及western-blot测定sdf-1。
1.2.2rt-pcr法检测sdf-1的表达提取肺组织总rna，分光光度仪上定量及检测rna纯度，用两步法rt-pcr。sdf-1上游引物：5′-cactttc-actctcggtccac-3′，下游引物为：5′-ctgaag-ggcacagtttggag-3′，序列长度约500bp。pcr反应条件：94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环。rt-pcr产物以10g/l琼脂糖凝胶电泳，电泳结果在gds-8000数码成像及系统上观察、拍照。
1.2.3western blot法检测sdf-1的表达左上肺组织用液氮粉碎及超声提取总蛋白后，每组取400μl总蛋白，加入等体积的2×sds凝胶加样缓冲液，100℃ 5min使蛋白变性;经120g/l sds变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后，电转印至pvdf膜;50g/l脱脂奶粉封闭后，sdf-1兔抗小鼠一抗(1∶200)及兔抗小鼠内参β-actin(1∶200)孵育4℃过夜，辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗(1∶500)37℃孵育2h后，ecl试剂进行检测，在flourchem fc2成像及系统中观察、拍照。
1.2.4免疫组织化学法检测sdf-1的表达哮喘组及对照组肺组织蜡块连续石蜡切片，经脱蜡至水后以0.3ml/l过氧化氢溶液浸泡10min，灭活内源性过氧化物酶;抗原热修复后以正常山羊血清封闭，分别加一抗即兔抗小鼠sdf-1抗体1∶200，4℃过夜;加生物素标记的二抗(羊抗兔igg 1∶200)，37℃，40min;加新鲜配制的二氨基联苯胺(dab)显色，苏木精复染细胞核，显微镜下观察5～10min，棕黄色染色为阳性。
1.3统计学应用spss16.0软件包行统计学。实验数据以均数±标准差表示，采用两样本t检验处理统计学数据，p<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1小鼠的一般情况及肺组织病理学改变哮喘组小鼠经激发后，出现烦躁不安，呼吸急促，腹部翕动，易激惹;对照组小鼠行动敏捷，一般情况未见异常。哮喘组小鼠肺组织切片he染色可见，小鼠细支气管周围和血管周围有大量的淋巴细胞、单核细胞和多形核细胞浸润，并伴有上皮脱落，气道壁增厚。对照组病理切片无上述表现(图1)。图1小鼠肺组织的病理学改变fig.1 he staining of lung histological sections (he, ×100)a：对照组;b：哮喘组。
2.2rt-pcr琼脂糖凝胶电泳结果哮喘组于500bp处出现特异性扩增条带，与预期趋化因子sdf-1扩增片段一致;对照组无特异性扩增条带。正常肺组织几乎无sdf-1 mrna，哮喘时肺组织有sdf-1 mrna(图2、表1)。图2rt-pcr法检测两组小鼠肺组织sdf-1mrna的表达 fig.2 the expression of sdf-1mrna in asthmatic mouse lung tissues on rt-pcrm：蛋白分子量标准;1：哮喘组;2：对照组。表1两组小鼠肺组织sdf-1mrna的表达
2.3western blot化学荧光法的检测结果哮喘组于15ku处有特异性条带显像，与sdf-1蛋白分子质量一致;对照组无特异性条带显像。正常肺组织无sdf-1蛋白表达，哮喘肺组织表达sdf-1蛋白(图3、表2)。图3western blot化学荧光检测两组小鼠肺组织sdf-1蛋白的表达情况 fig.3 the expression of sdf-1 protein in mouse lung tissues on western blot表2两组小鼠肺组织sdf-1蛋白的表达
2.4免疫组织化学(sabc)法的检测结果哮喘组可见支气管上皮细胞破坏，支气管和血管周围有大量炎细胞浸润，支气管壁及周围大量细胞于胞质内出现棕黄色阳性;对照组无上述病理变化，无棕黄色阳性出现(图4)。图4小鼠肺组织sdf-1表达的ih化学检测fig.4 immunohistochemisty staining of lung histological sections (sabc, ×100)a：对照组;b：哮喘组。
3讨论
sdf-1是由基质细胞产生的cxc型趋化因子，有sdf-1α、sdf-1β，sdf-1γ三个亚型。cxc族细胞因子受体4(cxcr4)是目前所知的sdf-1的唯一受体。sdf-1基因5′末端存在丰富的gc序列，而tata序列则极少表达。sdf-1在各物种中有高度保守性，在人与鼠的sdf-1的氨基酸序列中有95%是相同的[2]。
支气管哮喘是一种慢性气道炎症，伴有气道高反应性和气道重塑，气道重塑是哮喘难以治疗的主要因素之一。因此，防止或减轻气道重塑也就成为防治哮喘的重要策略，是呼吸领域备受关注的热点问题。我们采用rt-pcr、western blot方法检测到哮喘肺组织高表达sdf-1。
进一步采用免疫组织化学方法，发现sdf-1蛋白质主要分布于支气管壁及周围细胞的胞质内。近年来研究发现，在多种组织损伤修复过程中均有sdf-1的参与。例如，当心[3]、脑[4]、肝脏[5]、肾脏[6]等组织器官损伤时，病灶内sdf-1的分泌量显著增加，促进了纤维组织增生和新生血管形成。在博来霉素诱导的肺间质纤维化小鼠模型中，肺组织高表达sdf-1与肺纤维化有密切关系[7]。气道重塑的本质是一个在慢性炎症基础上的异常损伤修复过程，因此我们推测：在支气管哮喘导致气道重塑的过程中，肺部损伤释放趋化因子sdf-1可能在支气管哮喘气道重塑中起重要作用。
现有的研究表明，sdf-1与组织损伤的修复有着密切的关联，但其是否在哮喘气道重塑中起到作用，还需要做大量的研究。希望以此为切入点，为治疗支气管哮喘、防止或减轻气道重塑寻找到新的、更为有效的方法。
【参考文献】
[1]temelkovski j, hogan sp, shepherd dp, et al. an improved murine model of asthma: selective airway inflammation, epithelial lesions and increased methacholine responsiveness following chronic exposure to aerosolised allergen [j]. thorax, 1998, 53(10):849-856.
[2]murdoch c. cxcr4: chemokine receptor extraordinaire [j]. immunol rev, 2000, 177:175-184.
[3]kucia m, dawn b, hunt g, et al. cells expressing early cardiac markers reside in the bone marrow and are mobilized into the peripheral blood after myocardial infarction [j]. circulation res, 20xx, 95(12):1191-1199.
[4]imitola j, raddassi k, park ki, et al. directed migration of neural stem cells to sites of cns injury by the stromal cell-derived factor 1alpha/cxc chemokine receptor 4 pathway [j].proc natl acad sci usa, 20xx, 101(52):18117-18122.
[5]dalakas e, newsome pn, harrison dj, et al. hematopoietic stem cell trafficking in liver injury [j]. faseb j, 20xx, 19(10):1225-1231.
[6]togel f, isaac j, hu z, et al. renal sdf-1 signals mobilization and homing of cxcr4-positive cells to the kidney after ischemic injury [j]. kidney int, 20xx, 67(5):1772-1784.
[7]李文，吴东，梁标. 基质细胞衍生因子-1与肺纤维化关系的初步探讨 [j].
第七篇 浅析AngⅡ对腹膜间皮细胞ROS和NADPH氧化酶亚基p47phox表达的影响及黄芪的干预作用_药学论文
【摘要】 目的探讨angⅱ对腹膜间皮细胞ros和nadph氧化酶亚基p47phox表达的影响及二代腹膜间皮细胞经黄芪注射液(agi)预处理后的干预作用。方法体外培养sd大鼠原代腹膜间皮细胞至2代，静止24h后，随机分为：正常对照组(a组)，angⅱ(10-7mol/l)组(b组)，angⅱ+agi(2g/ml)组(c组)，angⅱ+agi(1g/ml)组(d组)。用荧光染料(dcf)及激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ros)。rt-pcr检测nadph氧化酶亚基p47phox的表达。western印迹检测p47phox的蛋白表达。结果①angⅱ可显著增加大鼠腹膜间皮细胞ros产生，20min后，ros的表达较对照组显著上升(p<0.05)。agi可显著抑制angⅱ后ros的产生,且agi对ros的抑制程度与agi的浓度呈正相关，b组、c组、d组三组比较后差异显著(p<0.05);②大鼠腹膜间皮细胞经angⅱ后，nadph氧化酶亚基p47phox mrna和蛋白的表达均上升，agi可抑制angⅱ诱导的p47phox mrna的表达上调，c、d两组分别与b组比较后差异显著(p<0.05)。结论angⅱ可诱导大鼠腹膜间皮细胞产生的ros增加、nadph氧化酶亚基p47phox表达上调;agi可抑制nadph氧化酶的表达和活性及ros的产生，从而为agi防治腹膜纤维化提供了理论依据。wwW.meiword.COm
【关键词】 腹膜间皮细胞;血管紧张素ⅱ;活性氧;nadph氧化酶;黄芪
abstract: objectiveto explore the effects of angiotensin ⅱ on the reactive oxygen species of peritoneum mesothelial cells and expression of nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate (nadph) oxidase subunit p47phox as well as the role of astragalus injection (agi) intervention for second-generation peritoneum mesothelial cells.methodsprimary rat peritoneum mesothelial cells were cultured into the second generation in vitro. after synchronization for 24 hours, the cells were randomly assigned to control group (group a), angⅱ (10-7mol/l) group (group b), angⅱ +agi (2g/ml) group (group c), and angⅱ +agi (1g/ml) group (group d). the dcf-sensitive cellular ros was measured by fluorometric assay and confocal microscopy. rt-pcr was employed to detect the mrna expression of nadph oxidase subunit p47phox, and p47phox protein expression was examined by western blot.results① angⅱ significantly induced the production of intracellular ros compared with control (p<0.05). after stimulation for 20 minutes, ros expression increased significantly compared with that in control group (p<0.05). agi inhibited angⅱ-induced ros generation, and the inhibitory effect was positively correlated with its concentration. groups b, c and d differed significantly from each other (p<0.05). ② angⅱ stimulated nadph oxidase subunit p47phox mrna and protein overexpressions, and agi inhibited the up-regulation of p47phox mrna overexpression. groups c and d were compared with group b, respectively (p<0.05). conclusionangⅱ can significantly induce the production of rat peritoneum mesothelial intracellular ros and up-overexpression of nadph oxidase and cellular ros generation, which provides theoretical basis for agis prevention of peritoneal fibration.key wores: peritoneum mesothelial cell; angiotensin ⅱ; reaction oxygen species; nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate (nadph) oxidase; astragalus
腹膜纤维化是长期腹膜透析(peritoneum dialysis, pd)患者的重要并发症之一，最终导致腹膜结构异常、丧失超滤功能而退出腹膜透析。高糖腹膜透析液可引起腹膜发生氧化应激反应，导致腹膜结构和功能异常。近年研究证实，血管紧张素ⅱ(angiotensin ⅱ, angⅱ)参与了腹膜间皮细胞的转分化和细胞外基质的积聚，与腹膜纤维化的发生发展密切相关[1-2];烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide-adenine dinucleotide phosphate, nadph)氧化酶作为活性氧(reactive oxygen species, ros)的调控酶，其胞浆亚基p47phox在多种组织的氧化应激反应中起着枢纽性作用[3-4]。调节nadph氧化酶亚基p47phox的表达及活性成为改善氧化应激状态、防治腹膜纤维化的重要切入点。色谱指纹图谱证实黄芪注射液有稳定的清除自由基、抗氧化的色谱峰[5]，超微结构证实黄芪注射液能拮抗高糖环境对腹膜间皮细胞的氧化应激损伤[6-7]。为此，本研究应用黄芪注射液来观察angⅱ对腹膜间皮细胞的影响，以探讨angⅱ对腹膜间皮细胞ros和nadph氧化酶亚基p47phox等表达的影响、及黄芪的干预作用，为腹膜纤维化防治提供新的思路。
1材料与方法
1.1主要试剂胎牛血清(fbs)、dmem/f12干粉培养基(gibco公司);胰蛋白酶(amerasco公司);angiotensinⅱ(sigma, usa);黄芪注射液(正大青春宝药业有限公司生产，国药准字z33020xx9，每支10ml相当于原材料20g);h2-dcfda(molecular probes, usa);trizol试剂(invitrogen公司);逆转录试剂盒(fermentas公司);taq dna聚合酶(fermentas公司);rnase抑制剂(gibco brl公司);焦碳酸二乙酯(depc，博彩公司);dna marker(dl2000，takara公司);琼脂糖(biolabs公司);兔抗大鼠p47phox抗体(upstate公司，usa);兔抗大鼠gapdh抗体(dako公司，denmark);bca法蛋白浓度测定试剂盒(pierce公司);temed(sigma公司)，其余化学试剂为国产纯。
1.2大鼠腹膜间皮细胞的分离与培养[8]健康清洁级雄性sd大鼠，体重180～220g，由河南科技大学机能实验中心提供，每只肌肉注射100ml/l水合氯醛约0.6～1.0ml。待麻醉后向大鼠腹腔内注射20～30ml 2.5g/l胰蛋白酶+0.2g/l edta消化液。2h后断颈处死大鼠，750ml/l酒精全身浸泡消毒5min。将大鼠仰面放置于超净工作台上，沿腹白线依次剪开腹壁皮肤及肌肉，吸出腹腔内液体，移入15ml离心管中。1500r/min离心15min，弃上清，加入含100ml/l fbs的dmem/f12培养液，轻轻用吸管吹打使之成为细胞混悬液，分装于25cm2的细胞培养瓶中。 再加入培养基使之总体积达到4～5ml，放入条件为37℃、950ml/l空气、50ml/l co2的细胞培养箱中培养。每3d更换一次培养基。免疫组织化学方法鉴定结果示细胞角蛋白(cytokeratin)阳性，将2代腹膜细胞随机分为以下4组：正常对照组，angⅱ(10-7mol/l)组，两组用无血清的dmem/f12培养基培养;黄芪注射液高浓度(2g/ml)干预组，黄芪注射液低浓度(1g/ml)干预组，两组提前孵育1h进行干预处理。在合适的时间点，观察以上各组各指标的变化情况。
1.3细胞内ros的测定ros的测定按文献报道方法[9]。具体如下：将细胞传至激光共聚焦专用培养皿(corning公司)，静止24h同步化后，krh缓冲液清洗3次，将各组细胞用10mg/l h2-dcfda避光孵育37℃ 15min，krh缓冲液再清洗3次，激光共聚焦显微镜观察，激发波长488nm，发散波长505nm，摄像。测定各组荧光强度值，并以对照组荧光强度为基线，计算其他各实验组相对荧光强度值。
1.4实时定量rt-pcr检测总rna提取按照trizol试剂说明书操作。取2μg总rna按反转录试剂盒说明书合成cdna。用实时定量pcr仪(美国mjresearch)检测mrna的表达。定量pcr反应体系：sybr green mix 7.5μl，引物各0.3μl，cdna 1.0μl，加三蒸水补足至15μl。反应条件：94℃预变性5min，92℃变性15s，60℃退火并延伸1min，共40循环，72℃终末延伸10min。pcr产物于12g/l琼脂糖凝胶电泳fluorechemtm8900凝胶成像系统成像，以目的基因与内参照gapdh积分吸光度的比值作为定量值进行统计。引物序列见表1。表1实时定量pcr的引物序列tab.1primers for rtq-pcr基 因引物序列产物长度
1.5western印迹
按文献报道方法[11]。取各组细胞，pbs洗2遍，加入细胞裂解液，收获蛋白质，4℃，12000r/min，离心15min，bradford法测定浓度。取适量的蛋白质标本，100g/l丙烯酰胺(sds-page)凝胶上电泳，电压90v 30min，140v 60min。室温恒压100v维持90min。丽春红染色硝酸素纤维膜，观察蛋白转移结果。tbst洗膜：室温下10min。50g/l脱脂奶粉阻断：室温下轻摇60min。tbst洗膜：室温下10min×3次。抗原抗体免疫反应加入tbst稀释的p47phox(1∶500)或gapdh(1∶1000)抗体孵育：4℃摇床轻摇过夜。tbst洗膜：室温下10min×3次。分别与辣根过氧化物共轭的抗-兔的ⅱ抗(1∶1000)及hrp-anti-biotin抗体(1∶1000)室温下孵育1h。tbst洗膜：室温下10min×3次。显影、检测ecl发光。室温下将膜浸于发光剂中1min后，取出膜甩去多余液体，将硝酸素纤维膜置于两张干净的保鲜膜之间，在暗室中对着x-线胶片曝光0.5～30min不等。胶片投入自动洗片机中冲洗和烤干。于凝胶成像系统进行目的蛋白及内参照gapdh条带灰度。
1.6统计学处理应用spss17.0统计软件进行。吸光度采用单位面积计算机图像扫描值减去背景值的均值表示强度，以gapdh作为内参照，计算两者吸光度的比值，并以对照组或0h组作为基准，计算其他各实验组相对吸光度值，以±s表示。组间比较采用单因素方差和snk-q检验。p<0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1大鼠腹膜间皮细胞的鉴定培养的大鼠腹膜间皮细胞呈菱形、椭圆形、多边形等，细胞融合后，呈典型的铺路石样。免疫组化结果示细胞角蛋白(cytokeratin)阳性。在angⅱ10-7mol/l浓度作用12h后，rpmcs失去原来的整齐排列，细胞间隙增宽，但细胞形态未出现明显的改变(图1)。图1腹膜间皮细胞的形态fig.1 morphology of peritoneal mesothelial cells (×200)a：正常大鼠腹膜间皮细胞的形态;b：血管紧张素ⅱ后大鼠腹膜间皮细胞的形态。
2.2angⅱ对ros产生的影响及黄芪的干预作用激光共聚焦显微镜观察dcf荧光强度代表ros产生的量。正常对照组(a组)，angⅱ(10-7mol/l)组(b组)，angⅱ+agi(2g/ml)组(c组)，angⅱ+agi(1g/ml)组(d组)，在dcf孵育20min后，ros的产生情况如图所示(图2)。统计学，腹膜间皮细胞经angⅱ20min后，ros产生较a组显著增加(p<0.05)。c组、d组均可显著逆转由angⅱ诱导的ros产生增加，与b组比较，均差异显著(p<0.05)。c组与d组相比较差异显著(p<0.05)，说明ros产生的量与agi的浓度呈负相关(图3)。图2激光共聚焦显微镜dcf荧光fig.2 dcf fluorescent model under laser confocal microscopea：正常对照组;b：angⅱ(10-7mol/l)组;c：angⅱ+agi(2g/ml)组;d：angⅱ+agi(1g/ml)。图3angⅱ对ros产生的影响及黄芪的干预作用fig.3 angiotensin ⅱ influenced ros production and effect of astragalus intervention (n=4)a：正常对照组;b：angⅱ(10-7mol/l)组;c：angⅱ+agi(2g/ml)组;d：angⅱ+agi(1g/ml)组。a vs. b，p<0.05;b vs. c，p<0.05;b vs. d，p<0.05;c vs. d, p<0.05。
2.3angⅱ对nadph氧化酶亚基p47phox表达的影响及黄芪的干预作用实时定量rt-pcr结果显示，angⅱ可诱导nadph氧化酶亚基p47phox mrna表达上调，且以时间依赖模式上调，p47phox mrna从4h开始有统计学差异(p<0.05)，至12h到达峰值(图4)。western blot结果显示，angⅱ可诱导p47phox蛋白表达以时间依赖模式上调，从12h开始有统计学差异(p<0.05)，至48h达峰(图5)。图4angⅱ诱导nadph氧化酶亚基p47phox mrna的表达情况fig.4 ang ⅱ induced nadph oxidase subunits p47phox mrna expression (n=4)4、8、12、24h vs. 0h，p<0.05。 图5angⅱ诱导nadph氧化酶亚基p47phox蛋白的表达情况fig.5 ang ⅱ induced nadph oxidase subunits p47phox protein expression (n=4) 12、24、48、72h vs. 0h，p<0.05。pmcs经agi预处理后，再行angⅱ体外，可显著逆转由angⅱ诱导的nadph氧化酶亚基p47phox mrna表达上调，c组、d组分别与b组比较，具有显著差异(p<0.05)，但未观察到c组与d组有显著性差异，agi对p47phox mrna表达的抑制度不依赖浓度模式(图6)。图6agi预处理可显著逆转angⅱ诱导的nadph氧化酶亚基p47phox mrna表达的上调fig.6 agi pretreatment could reverse ang ⅱ’s induction of nadph oxidase subunits p47phox mrna expression(n=4)a：正常对照组;b：angⅱ(10-7mol/l)组;c：angⅱ+agi(2g/ml)组;d：angⅱ+agi(1g/ml)组;a vs. b，p<0.05;b vs. c，p<0.05;b vs. d，p<0.05。
3讨论
腹膜纤维化是腹膜透析的重要并发症之一，对其发病机制的不断探讨、寻找新的治疗靶点及有效干预剂是腹膜透析进一步发展的迫切需要。angⅱ不仅作为一种血管活性物质参与ras的活化效应过程，而且局部产生的angⅱ作为一种重要的生长因子参与调节细胞的增值、凋亡及纤维化进程，是引起腹膜纤维化的重要因子之一[10-12]。nadph氧化酶是一种过氧化物酶, 广泛存在于吞噬细胞及非吞噬细胞，其催化产物活性氧( reactlve oxygen species, ros) 参与机体防御和信息传递等许多生理过程。nadph氧化酶主要由5个亚基组成，包括2个膜亚基：gp91phox、p22phox;3 个胞浆亚基：p47phox、p40pox、p67phox。另外，还有2个低分子量的gtp结合蛋白rap1a和rac2。当细胞受到相应后, 胞浆亚基p47phox被磷酸化激活，与p67phox结合并向胞膜转位，与胞膜亚基结合组成有氧化活性的复合体，将氧催化为-o2-，进而产生一系列活性氧，造成细胞损伤。nadph氧化酶作为ros的调控酶，其胞浆亚基p47phox在多种组织的氧化应激反应中起着始动、枢纽性作用[13-15]。如前所述，色谱指纹图谱证实黄芪注射液有稳定的清除自由基、抗氧化的色谱峰，其拮抗高糖环境对腹膜间皮细胞的氧化应激损伤的作用已被证实。该实验研究中，在angⅱ作用下，ros的产生明显增加，腹膜间皮细胞nadph氧化酶亚基p47phox mrna和蛋白结果一致，均呈时间依赖模式的表达上调。我们应用黄芪注射液预处理后发现，黄芪不仅可明显减少由angⅱ诱导的腹膜间皮细胞ros的产生，而且可使nadph氧化酶亚基p47phox的表达降低。该实验表明黄芪不仅能够抑制nadph氧化酶的表达，而且可抑制其活性。 由此我们推测，黄芪通过抑制腹膜间皮细胞nadph氧化酶的表达及其活性，从而减少腹膜间皮细胞ros的产生，阻断ros在其中的传导作用，及下游因子tgf-β的过度表达，减轻细胞的转分化和细胞外基质的积聚，增加细胞外基质的降解而发挥其延缓腹膜纤维化的作用。
综上所述，长期腹膜透析患者，腹膜间皮细胞暴露于腹透液高糖、低ph值、乳酸盐和葡萄糖降解物gdp等多种生物不相容因素下，可导致腹膜纤维化，angⅱ、ros、nadph氧化酶均参与其中。腹膜间皮细胞经angⅱ，其ros产生明显增多。ros产生增多与其调控酶——nadph氧化酶的表达上调密切相关。黄芪注射液能够抑制nadph氧化酶的表达，减少腹膜间皮细胞ros的产生，从而减少腹膜的氧化应激损伤，延缓腹膜纤维化的发生发展。
【参考文献】
[1]kiribayashi k, masaki t, naito t, et al. angiotensinⅱ induces fibronectin expression in human peritoneal cells via erk1/2 and p38mapk [j]. kidney int, 20xx, 67:1126-1135.
[2]noh h, lee hb, yu mr, et al. angiotensin ii mediates high glucose-induced tgf-beta1 and fibronectin upregulation in hpmc through reactive oxygen species [j]. perit dial int, 20xx, 25(1):38-47.
[3]karen b, karl-heinz k. the nox family of ros-generating nadph oxidases: physiology and pathophysiology [j]. physiol rev, 20xx, 87:245-313.
[4]ha h, cha mk, choi hn, et al. effects of peritoneal dialysis solutions on the secretion of growth factors and extracellular matrix proteins by human peritoneal mesothelial cells [j]. perit dial int, 20xx, 22(2):171-177.
[5]张磊，聂磊，王唯红. 黄芪注射液色谱指纹图谱与抗氧化作用的相关 [j]. 中药材，20xx, 32(11):1757-1760.
[6]舒静，王怡，张晓云. 黄芪注射液拮抗高糖腹膜透析液对腹膜间皮细胞紧密连接的影响 [j]. 上海中医药大学学报, 20xx, 21(4):50-53.
[7]徐家云，王俊霞，孟晓青，等. 黄芪注射液对大鼠腹膜透析效能及腹膜超微结构的影响 [j]. 河南科技大学学报, 20xx, 24(2):81-83.
[8]yang x, ye r, kong q, et al. cd40 is expressed on rat peritoneal mesothelial cells and upregulates icam-1 production [j]. nephrol dial transplant, 20xx, 19(6):1378-1384.
[9]zhang z, yuan w, sun l. 1,25-dihydroxyvitamin d3 targeting of nf-κb suppresses high glucose-induced mcp-1 expression in mesangial cells [j]. cult rev, 20xx, 72(2):193-201.
[10]rhyu dy, yang yq, ha h, et al. role of reactive oxygen species in tgf-β-induced mitogen-activated protein kinase activation and epithelial-mesenchymal transition in renal tubular epithelial cells [j]. j am soc nephrol, 20xx, 16(1):667-675.
[11]schilte mn, wam celie j, ter-wee pm, et al. factors contributing to peritoneal tissue remodeling in peritoneal dialysis [j]. perit dial int, 20xx, 29(6):605-617.
[12]ruiz-ortega m, ruperez m, esteban v, et al. angiotensin ⅱ: a key factor in the inflammatory and fibrotic response in kidney diseases [j]. nephrol dial transplant, 20xx, 21(1):16-20.
[13] siow yl, au-yeung kk, woo cw, et al. homocysteine stimulates phosphorylation of nadph oxidase p47phox and p67phox subunits in monocytes via protein kinase cbeta activation [j]. biochem j, 20xx, 398(1):73-82.
[14]li jm, shah am. ros generation by nonphagocytic nadph oxidase: potential relevance in diabetic nephropathy [j]. j am soc nephrol, 20xx, 14:s221-s226.
[15]chen jx, stinnett a. critical role of the nadph oxidase subunit p47phox on vascular tlr expression and neointimal lesion formation in high-fat diet-induced obesity [j]. labinvest, 20xx, 88(9):1316-1328.
第八篇 浅析亚洲带绦虫膜联蛋白B2基因的表达、纯化及免疫学_药学论文
【摘要】 目的对亚洲带绦虫膜联蛋白b2(annexins b2)进行克隆表达及免疫学初步研究。方法利用在线生物信息学工具从亚洲带绦虫成虫cdna文库中筛选出annexins b2基因，并将该基因克隆到原核表达质粒pet-28a(+)中，在大肠埃希菌bl21/de3中诱导表达，表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)鉴定，重组后的蛋白用his-镍蛋白纯化柱纯化，纯化的重组蛋白用western blotting进行免疫学。结果pcr、双酶切及重组质粒dna测序均显示重组体构建成功，并得到高纯度的蛋白，且该重组蛋白可被亚洲带绦虫、猪带绦虫及牛带绦虫患者的血清识别。结论亚洲带绦虫成虫annexins b2基因可在原核表达系统中获得具有免疫活性的高效表达。
【关键词】亚洲带绦虫;膜联蛋白b2;基因克隆;免疫反应性
abstract: objectiveto clone and express the gene named as annexins b2 of taenia saginata asitica so as to yze the immunogenicity of its recombinant protein.methody online ysis of the gene at bioinfomatics websites to identify the gene from the taenia saginata asiatica full-length cdna plaid library, the gene was cloned into prokaryotic expression vector pet-28a(+) and then transformed to e.coli bl21 with iptg induction. thereafter, the gene product was yzed by sds-page and purified by ni-nta affinity chromatography. in addition, the immunoreactivity of the purified recombinant proteins was yzed by western blotting.resultsas demonstrated by pcr, double enzyme digestion and dna sequencing indicated that the recombinant plaid was successfully constructed and highly expressed. the recombinant protein tested with western blotting ysis could react with taenia asiatica and taeniarhynchus saginatus infected patient serum.conclusionthe annexins b2 of taenia saginata asitica has been cloned and expressed in the prokaryotic expression system and the purified protein has been confirmed with immunogenicity.
key words: taenia saginata asiatica; annexins b2; gene cloning; immunoreactivity
鉴于亚洲带绦虫与猪带绦虫及牛带绦虫在起源、分类学地位存在的差异[1-2]，本课题组率先构建亚洲带绦虫成虫全长cdna质粒文库，并对该虫进行功能基因组的研究工作[3]。WwW.meiword.Com本文利用生物信息学工具从文库中筛选到了一个膜联蛋白b2(annexins b2)的同源基因，构建了原核表达载体，并对其原核表达产物进行免疫学方面的初步研究。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1血清、载体与菌株3种人体带绦虫患者血清取自粪检阳性的带绦虫患者。原核表达质粒pet-28a(+)及大肠埃希菌bl-21/de3由中山大学热带病防治重点实验室惠赠。
1.1.2主要试剂和工具酶ex taq酶(含dntp)，bamhⅰ，xhoⅰ，t4 dna连接酶 (大连宝生物工程公司);异丙硫代-β-d半乳糖苷(iptg)(美国promega公司);质粒纯化试剂盒(广州东盛科技公司);辣根过氧化物酶标记的山羊抗猪igg二抗、兔抗人二抗、3，3二氨基联苯胺(dab)显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);氯化钙、氯化钠等为国产纯试剂。
1.2方法
1.2.1annexins b2基因的识别及扩增将获得的亚洲带绦虫annexins b2基因进行blastx。并根据已获得的该基因全长编码序列的开放阅读框，利用软件设计引物(引物由上海联合基因公司合成)，分别带上bamhⅰ和xhoⅰ的酶切位点进行pcr反应。
1.2.2重组原核表达质粒的构建及鉴定pcr产物和pet-28a(+)载体分别用bamhⅰ和xhoⅰ双酶切，回收、连接后转入大肠埃希菌bl-21/de3感受态细胞，对阳性克隆依次进行质粒的提取、双酶切和pcr鉴定，并进行重组质粒dna测序鉴定(测序由英俊科技股份有限公司完成)。
1.2.3重组蛋白的表达及纯化按照常规方法进行蛋白诱导表达，考马斯亮兰蛋白染色液染色观察蛋白表达情况。确定蛋白表达后，进行大量的诱导表达，并判断重组蛋白的可溶性，再将样品加入预先处理好的ni-ida his.bind树脂亲和层析纯化柱中，最后再用pbs 24h透析以去掉过柱时留下的咪唑。1.2.4western blotting重组蛋白的免疫反应性用3种人体带绦虫患者及正常人血清与辣根过氧化物酶(hrp)标记的兔抗人igg进行western blotting鉴定。
2结果
2.1annexins b2基因的识别和序列该基因全长922bp，编码区为224～686bp。其最大orf为其完整编码区。
2.2原核重组质粒的鉴定将重组质粒进行pcr和双酶切鉴定，产物行0.8g/l琼脂糖凝胶电泳。结果显示在500bp左右有一清晰条带，与目的基因大小基本相符。此外，重组质粒的测序报告表明插入序列与理论序列一致，证明重组质粒构建成功(图1)。
2.2蛋白表达及纯化结果将构建好的重组质粒转化到e.coli bl/de3中，超声裂解后sds-page电泳结果显示在大约25ku处出现高效表达条带(图2)，与目的蛋白基本相符。测得纯化产物的蛋白浓度为0.526g/l。
2.3western blotting鉴定纯化蛋白的免疫反应性
用感染亚洲带绦虫、猪带绦虫、感染牛带绦虫的患者血清以及亚洲带绦虫感染猪的血清与纯化蛋白反应的结果均显示出较清晰的条带，而阴性对照血清在相应位置未识别出该蛋白条带(图3)，表明该表达产物具有良好的免疫反应性。图1重组质粒的pcr和双酶切鉴定 fig.1 the identification of the pet-28a(+)-ta annexins b2 by pcr amplification and digestion with restriction enzyme1：dna标准(dl2000);1：pcr产物;2：pet-28a(+)质粒双酶切;3：pet-28a(+)-annexins b2重组质粒双酶切;m2：dna标准(dl 15000)。图2100g/l sds-pagepet-28a(+)-ta annexins b2在大肠埃希菌中的表达产物及其纯化产物fig.2 100g/l sds-page ysis of the prokaryotic expression product and purified product m：蛋白marker;1：pet-28a(+)iptg未诱导;2：pet-28a(+)iptg诱导;3：pet-28a(+)-annexins b2 iptg未诱导;4：pet-28a(+)-annexins b2 iptg诱导;5：pet-28a(+)-annexins b2上清;6：pet-28a(+)-annexins b2沉淀;7：pet-28a(+)-annexins b2纯化蛋白。
3讨论
带绦虫病的流行在我国西部一直是一个严重的公共卫生问题。每年由带绦虫病造成的健康和畜牧业经济损失上百亿，严重影响西部欠发达地区的社会发展。目前，亚洲带绦虫病的防治研究的重点集中在诊断和疫苗候选抗原、药物靶标、致病的分子机制研究。图3重组蛋白的western blotting 鉴定fig.3 western blotting ysis of the recombinant：蛋白marker;1：纯化蛋白与亚洲带绦虫患者血清的反应结果;2：纯化蛋白与牛带绦虫患者血清的反应结果;3：纯化蛋白与猪带患者血清的反应结果;4：纯化蛋白与亚洲带绦虫感染猪血清的反应结果;5：纯化蛋白与正常人血清的反应结果。
本实验通过生物信息学方法从已经构建好的亚洲带绦虫成虫cdna质粒文库中筛选出了一个膜联蛋白(annexins b2)的同源基因，并且预测出该基因位于胞浆，无跨膜区，二级结构基本上是以α螺旋为主。这些都符合膜联蛋白家族的共同特征[4]。根据膜联蛋白家族分布广泛，表达丰富且稳定的特性，可以推测其在绦虫的生理活动中可能起着重要的作用。
膜联蛋白是一个广泛存在的蛋白家族，在所有真核基因组中广泛表达。具有内部重复单位和“g-x-g-t-(38residues)-d/e”基序[5]，即ca2+结合区域的特征，用以结合带有负电的脂质。虽然它为钙结合蛋白，但是在结构上却没有ef手，而且在和ca2+结合后，还可以与磷脂再次结合而发挥生物学效应。例如，细胞的胞吞胞吐，离子通道的形成，调节磷脂酶a2的活性及细胞内外ca2+浓度、抗炎症反应等。在长期的生物进化过程中，膜联蛋白家族各成员在生物学特性和生理功能方面表现出非常复杂的关系，且在研究过程中发现，annexins没有肽，没有跨膜结构，是一个典型的细胞内蛋白。但是，却有学者发现它可以与细胞外基质发生作用。例如，抗炎[6]、抗凝[7]、抑制肿瘤[8]等。最新的研究报道，当将其作为疫苗的候选因子时，可以消除一些寄生于哺乳动物体内的寄生虫。此外，学者们认为膜联蛋白是维持细胞膜表面结构和转导功能的重要蛋白。并可能具有激活纤维蛋白酶原的功能，有助于破坏宿主的结缔组织，使虫体抗原更加容易进入宿主机体，诱发免疫应答。因此，对该基因的研究有助于进一步了解它的生物学功能及开辟预防治疗寄生虫病的新途径[9-10]。
目前，annexins b2已经在猪囊尾蚴的研究被发现并命名，但是具体的生理功能还不清楚，且在亚洲带绦虫研究领域还是空白。因此，本研究将亚洲带绦虫成虫annexins克隆到原核表达质粒pet-28a(+)中，构建重组质粒，在大肠埃希菌bl-21/de3中用iptg诱导表达，表达产物通过sds-page电泳进行鉴定。sds-page结果表明，该蛋白在全菌和沉淀中都有表达，上清中有微量的表达，说明annexins主要表达在包涵体中。因此，进一步溶解包涵体[11]，经变性处理并亲和层析纯化后，得到了大量较纯的重组蛋白。此外，还尝试性的用上清过柱纯化并用蔗糖进行蛋白浓缩，也得到部分有活性的蛋白。western blotting就是以抗体-抗原沉淀反应为基础的，可用于不同抗原的比较和定量。其检测结果表明所获得的重组蛋白与猪带绦虫、牛带绦虫及亚洲带绦虫有较强的交叉反应且在绦虫中的诊断特异性不高，推测其不能作为免疫诊断抗原的合适候选分子。但是，其具有免疫活性的高效表达。由此可推测它是一个具有开发潜力的基因。总之，本项研究填补了该蛋白在亚洲带绦虫研究领域的空白，也为进一步研究该基因的生物学功能及在诊断尤其是疫苗研究方面奠定了基础。
【参考文献】
[1]包怀恩. 我国亚洲带绦虫研究的现状和展望 [j]. 热带医学杂志, 20xx, 2(3):215-219.
[2]张朝云，杨明，张科，等. 云贵州三地牛带绦虫核糖体trna-its1序列 [j].贵阳医学院学报, 20xx, 31(4):291-295.
[3]黄江，胡旭初，包怀恩，等. 亚洲带绦虫成虫全长cdna质粒文库的构建及est测序 [j]. 热带医学杂志, 20xx, 7(2):116-118.
[4]moss se, morgan ro. the annexins [j]. genome biol, 20xx, 5:219-221.
[5]choi sh, kwon sr, lee eh, et al. molecular cloning, functional characterization and localization of an annexin from a fish gill fluke microcotyle sebastis (platyhelminthes: monogenea) [j]. mol & bioche parasitol, 20xx,163(1):48-53.
[6]高奋堂，曹云山，徐义先，等. 氟伐他汀对人外周血单个核细胞膜联蛋白a1表达水平的影响 [j]. 临床心血管病杂志, 20xx, 22(4):209-211.
[7]王义会，闫强，王平，等. 膜联蛋白b2基因的克隆及其真核表达载体的构建 [j]. 动物医学进展, 20xx, 28(3):31-33.
[8]朱逢佳，曾苏，曹江. 膜联蛋白-1与肿瘤[j]. 细胞生物学杂志, 20xx, 30(5):581-585.
[9]zhang y, wang kh, guo yj, et al. annexin b1 from taenia solium metacestodes is a newly characterized member of the annexin family [j]. biol chem, 20xx, 388(6):601-610.
[10]wu d, guo yj, lin y, et al. protective immunity induced by dna vaccine of cysticercus cellulosae antigen [j]. acad j sect mil med univ, 2000, 6(21):508-510.
[11]马歇尔dr，门永jt. 蛋白质纯化与鉴定实验指南 [m]. 第1版，：科技出版社, 1999:148-151.
第九篇 α糜蛋白酶联合消痔灵在腘窝囊肿介入超声治疗中的应用_临床医学论文
【摘要】 目的 探讨介入超声引导下套管针经皮穿刺α糜蛋白酶联合消痔灵囊内注射硬化治疗腘窝囊肿的方法、疗效和临床应用价值。方法 20例腘窝囊肿患者在超声引导下采用套管针(16g“bd”留置针)进行穿刺、抽吸囊液、α糜蛋白酶生理盐水溶液冲洗囊腔后,囊内注入消痔灵进行硬化治疗。结果 术后1个月、3个月、6个月进行超声随访，1次治愈17例(85.00%),2次治愈1例(5.00%),3次治愈1例(5.00%),无效1例(5.00%)。其中ⅰ型腘窝囊肿15例，一次痊愈14例，2次痊愈1例；ⅱ型腘窝囊肿2例，一次痊愈1例，2次痊愈0例，无效1例；ⅲ型腘窝囊肿3例，1次注射一次痊愈2例，2次痊愈0例，3次痊愈1例。结论 超声引导下套管针经皮穿刺α糜蛋白酶联合消痔灵硬化治疗腘窝囊肿具有微创、安全、有效等优点。
【关键词】 超声引导 介入治疗 腘窝囊肿 α 糜蛋白酶 消痔灵
本院于20xx年8月～20xx年12月，应用超声引导经皮穿刺治疗腘窝囊肿20例，疗效显著，现报告如下。wwW.meiword.COm
资料与方法
1.一般资料
20例腘窝囊肿患者，男8例，女12例，年龄26～55岁，左侧11例，右侧9例，共20个囊肿，囊肿大小为35 mm×31 mm×22 mm～110 mm×106 mm×58 mm之间，其中ⅰ型腘窝囊肿15个，ⅱ型腘窝囊肿2个，ⅲ型腘窝囊肿3个。主要症状以患者腘窝处肿胀不适或腘窝包块而就诊，少数以超声检查下肢血管时发现，超声检查显示腘窝区探及大小不等的、呈规则的椭圆形或不规则形的无回声团，边界清楚，大多囊壁较薄，内壁光滑，有的囊壁较厚，内壁毛糙，囊内多呈透声好的无回声，少数囊内呈絮状回声，囊性肿块多呈单房，少数可见带状高回声分隔。病史1个月～5年；首诊者17例，手术后复发者3例。
2.方法
使用仪器为ge logic pro7彩超，探头频率7.5～13 mhz；采用套管针(16g“bd”留置针)。术前常规检查肝肾功能、血常规、出凝血时间、彩超等检查，发现血小板异常或出、凝血时间异常者禁忌穿刺。硬化治疗术前超声发现囊置较高、超声不能确定蒂部是否有细管道与膝关节腔相通者则予囊腔冲洗后注入1/2～3/4囊液量的泛影葡胺，行x线下透视，确定囊肿与膝关节腔不相通后方可继续进行硬化治疗。患者取俯卧位，穿刺前对患处行多切面扫查，选择最佳进针方向，常规消毒皮肤，局麻后选取囊肿长轴最表浅处并避开腘窝之血管及腓总神经走行部位作穿刺点。采用16 g“bd”留置针(1.7 mm，51 mm)穿刺，超声监视下穿刺至针尖接近远端囊壁拔出针芯，固定套管，抽取囊液并记录囊液量，然后用α糜蛋白酶生理盐水溶液(250 ml生理盐水中加入15～20 mg α糜蛋白酶)冲洗囊腔，至抽出液体变清亮后，囊内注入消痔灵注射液（将消痔灵注射液与2％利多卡因混合配制成1∶1浓度），注入腔内的药量与抽出的胶状物量呈1∶1，即抽出1 ml的胶状物则注入1 ml的消痔灵混合液。ⅰ型及ⅲ型腘窝囊肿患者可任意选取方便治疗的，ⅱ、ⅲ型腘窝囊肿患者则需变换以使囊于膝关节腔重力水平的下部。轻揉使药液均匀分布于囊腔与囊颈部，停留5 min后抽出，反复2～3次，拔出针头，用无菌敷料包扎，绷带加压固定。治疗后24～48 h患侧膝关节制动，ⅱ型腘窝囊肿患者术后均用绷带于蒂部水平加压包扎，48～72 h内保持囊肿体部低于膝关节腔重力水平的，手术后用绷带加压包扎3 d。术后给予口服抗生素3 d，1周后抽出囊内渗出液后用α糜蛋白酶溶液冲洗囊腔并加压包扎。介入治疗后分别在1、3、6个月进行超声随访。若第1次注射6个月后囊肿没有完全消失，行第2次治疗，3次治疗无效者建议手术。
3.疗效标准
治愈：经1～3次穿刺治疗后超声检查囊肿随时间延长越来越小，囊肿闭合消失、囊壁增厚，随访6个月以上无复发。无效：囊肿逐渐增大恢复到原来大小。
结 果
1.治疗效果
1次治愈17例(85.00%),2次治愈1例(5.00%),3次治愈1例(5.00%),无效1例。其中ⅰ型腘窝囊肿15例，一次痊愈14例，2次痊愈1例；ⅱ型腘窝囊肿2例，一次痊愈1例，2次痊愈0例，无效1例；ⅲ型腘窝囊肿3例，1次注射一次痊愈2例，2次痊愈0例，3次痊愈1例。
2.并发症
穿刺局部出现轻至中度疼痛者4例，均可忍受，于24～72 h内自行缓解，未做特殊处理。
讨 论
腘窝囊肿亦称baker囊肿，是临床最常见的滑液囊肿。它位于膝关节后方，充满滑液的硬性包块。成人发生者大多数有其他关节疾病。小儿则多为原发性，由连续轻微外伤所引起。囊肿有完整囊壁，内衬有滑膜，腔内含有滑液［1］。腘窝囊肿可有三种不同的来源，一为腓肠肌内侧头的腱鞘囊肿，二为腓肠肌和半腱肌的慢性滑囊炎，三为膝关节囊滑膜的囊性膨出［2］。根据高频超声腘窝囊肿的表现，声像图可分为3型：ⅰ单纯囊肿型，囊肿与关节腔不通；ⅱ分叶囊肿型，囊肿基底部与关节腔相通；ⅲ囊液浑浊型，囊肿壁毛糙增厚，内见密集点状回声，呈悬浮状，可漂动［3］。临床上腘窝囊肿的常规治疗是外科手术，但有些囊肿因发生部位与周围解剖关系复杂，手术剥离囊壁比较困难，很难剥离干净，残存的滑囊细胞极易导致囊肿复发，疗效尚不满意。超声引导下的介入治疗具直观、实时、微创、费用低等独特优势，是目前较为有效的治疗手段。选择恰当的穿刺途径，能够缩短穿刺距离，提高命中率，降低并发症［4］。而超声引导下经皮穿刺置管引流(ugtppcd)术具有适应证广、高效等特点，是目前介入超声应用中较理想的治疗性手段之一。套管针穿刺克服了金属穿刺针难以固定的缺陷，使介入治疗更为安全有效。
腘窝囊肿硬化治疗的原理是利用硬化剂使囊肿内壁细胞脱水、变性、坏死而丧失分泌功能，致使囊壁皱缩粘连、囊腔闭塞而达到治愈。常用的硬化剂有无水乙醇、高渗糖等。近年来有人应用消痔灵作为硬化剂囊内注射治疗滑囊炎，疗效满意［5］。消痔灵注射液是由中草药五倍子、枯矾的提取物辅以几种化学药物组成，主要含鞣酸、低分子右旋糖酐、三氯叔丁醇、枸橼酸钠、甘油、亚硫酸氢纳等制成的灭菌注射制剂［6］，常用于肛肠科注射治疗内痔出血及脱垂。该药中的五倍子、明矾具有收敛作用，能使囊液分泌减少，甘油在组织中吸收缓慢，可组织引起无菌性炎症粘连。利用该药的这一特性用于腘窝囊肿腔内注射，使其分泌减少，慢性无菌性炎症使其囊颈、囊壁粘连，从而使囊腔闭塞而达到治愈。因腘窝囊肿的囊液为以黏蛋白为主的胶冻状分泌物，不易冲洗干净，残留的黏液可能阻碍硬化剂对囊壁细胞充分作用，若囊壁破坏不完全则容易复发。α糜蛋白酶可迅速分解附着于囊壁内表面的黏蛋白，有利于彻底冲洗囊腔，提高硬化治疗效果。本组病例中ⅰ型腘窝囊肿治疗效果好，ⅱ型腘窝囊肿因与关节腔相通，治疗效果欠佳，ⅲ型腘窝囊肿因囊液黏稠，分隔较多，囊内有出血及感染，疗效不如ⅰ型腘窝囊肿。我们认为治疗应注意：①需选好穿刺点，尽量靠近病灶部位，减少损伤周围组织，避免损伤关节囊，避免将药物注入关节囊或污染关节腔，进针方向尽量与关节囊切线平行，避免选择垂直关节囊方向进针以免刺入关节囊。②囊液须尽可能抽吸完全，以免影响药物的弥散度，导致局部粘连不佳。③用药须足量，以免引起囊肿内壁接触不到药物而影响效果。④在使囊壁凝固的同时，可使局部产生无菌性炎症渗出造成囊肿的“复原现象”，这种现象在治疗后一周内出现，超声观察囊腔较治疗前明显缩小，一般无须处理，3个月内会逐渐变小直到消失。若3个月后仍未消失且囊腔最大直径＞20 mm，可重复治疗［7］。
本组患者未出现局部或膝关节剧烈疼痛，无局部神经、血管损伤、膝关节功能障碍等严重并发症发生。我们认为本疗法治疗腘窝囊肿具有微创、安全、有效等优点，疗效可靠，操作简单，患者无明显不良反应，值得推广。
【参考文献】
［1］张缙熙，姜玉新.浅表器官及组织超声诊断学［m］.第1版.：科学技术文献出版社,2000,192.
［2］李世民，党耕町.临床骨科学［m］.第1版.天津：天津科学技术出版社，1998,611-612.
［3］康利克.高频超声对腘窝囊肿的诊断［j］.中国超声诊断杂志，20xx，（11）：894-895.
［4］臧步成.超声引导下腹腔穿刺治疗阑尾脓肿9例［j］.右江医学，20xx（23）6：640.
［5］陈首云，龚武陵.消痔灵囊内注射治疗滑囊炎52例报告［j］.中国社区医师·综合版，20xx，（19）：28.
［6］周方.综述消痔灵注射液的应用现状［j］.内蒙古中医药，20xx,(6):62-63.
［7］王树松，颜翠兰，李春梅,等.彩超引导介入治疗腘窝囊肿23例［j］.中国微创外科杂志,20xx，（10）：785-786.
作者：邓志阳，万月明 作者单位：广东省佛山市顺德区乐从医院，广东顺德 528315
第十篇 多层螺旋CT尿路成像(CTU)与静脉肾盂造影(IVP)对比性研究_临床医学论文
【摘要】 目的：比较ct尿路成像(ctu)与静脉肾盏造影(ivp)对诊断泌尿系疾病的差异性。方法：41例病例均做ctu与ivp，两者均统计诊断阳性率，进行对比性研究，应为统计学t检验，以验证两种方法是否有差异性，(p<0.01)，有统计学意义。结论：ct尿路成像(ctu)与静脉肾盏造影(ivp)相比，对于泌尿系疾病诊断阳性率明显提高，完全可以部分取代静脉肾盏造影(ivp)。
【关键词】 ct尿路成像 静脉肾盂造影(ivp) 比较
multi-layered screw ct urine road image formation (ctu) and vein renal pelvis radiography (ivp) relative property research
chaihongbo renjiageng yiyanhua yangshuiying
guangdong province qingyuan lianzhou people'hospital x-ray department(513400)
abstract objective:to compare ct urography (ctu) with intravenous contrast renal calyx (ivp) in the diagnosis of urinary tract diseases of difference.methods:41 cases were done ctu and ivp,both positive diagnostic rate statistics,comparative studies,should be statistical t test to verify whether there are differences of two methods,p<0.01,statistically significant.conclusion:ct urography (ctu) with intravenous contrast renal calyx (ivp) compared to positive for the diagnosis of urinary tract disease was significantly improved, can partially replace intravenous calyceal contrast (ivp).
key words ct urine road image formation;vein renal pelvis radiography (ivp);compared with
多层螺螺旋ct尿路成像(ctu)是伴随螺旋ct的发展而形成的一种新的检查手段，是通过静脉注入造影剂，经过多期扫描及后处理重建，产生类似于静脉肾盂造影(ivp)的效果，但相对于静脉肾盂造影(ivp)更为清晰、直观，功能更为全面，可替代静脉肾盂造影(ivp)进行肾、输尿管、膀胱成像，值得推广和应用。WWw.meiword.coM
资料与方法
收集1年以来做ct尿路成像40例，每位患者同时都进行静脉肾盂造影(ivp)检查，ctu尿路成像采用应用飞利浦16层螺旋ct，扫描参数，120kv，250ma，螺距0.94，扫描前服清水800～1000ml，仰卧位，扫描范围自肾上极至膀胱下极，层厚2mm，间距1mm。先常规平扫，后肌注肌松剂(盐酸654-2注射液)10mg，再用高压注射器，经肘静脉4ml/s注射碘海醇80～100ml，先行动、静脉双期扫描，为肾皮质期，5分钟后扫描，为肾髓质期(输尿管期)，扫描完成后，嘱患者走动，10/15/30分钟，进行延迟扫描，视膀胱充盈情况决定是否继续延迟扫描。所得数据均可进行三维重建，三维重建方法主要有mpr(多平面重建)，cpr(曲面重建)，mip(最大密度投影)，vr(容积再现)等，结合平扫可以更好的显示病灶。静脉肾盂造影(ivp)先拍摄腹平片，经肘静脉注入造影剂，7分钟、15、30分钟腹部加压各拍摄1张cr片，减压后再拍1张cr片，x光机为日立500man x线机，cr扫描仪为富士cr多通道扫描仪。两者均统计诊断阳性率，进行对比性研究，应用统计学t检验，以验证两种方法是否有差异性。
结 果
40例病人，男26例，女14例，平均年龄42岁，其中泌尿系结石22例，ct尿路成像均能发现，肾结石18例，输尿管结石上段8例，中段4例、下段3例，膀胱结石1例，静脉肾盂造影(ivp)能发现例;肾积水25例，ct尿路成像均能发现，其中轻度积水7例，其中1例合并肾错构瘤，中度积水1例，重度积水14例，双侧积水3例，其中1例为双侧重度积水，静脉肾盂造影(ivp)能发现18例;泌尿系ctu冠状位重建可见双肾多发结石，盆腔异位肾。ctu三维重建(vr图)ivp示右肾重度积水，盆腔内结石。
肿瘤6例，ct尿路成像均能发现，其中肾盂肿瘤1例，膀胱肿瘤5例，静脉肾盂造影(ivp)能发现3例;尿路先天畸形3例，ct尿路成像均能发现，其中1例为双肾盂、双输尿管畸形，1例为一侧肾旋转不良，1例为一侧肾旋转不良合并对侧异位肾，静脉肾盂造影(ivp)能发现2例，异位肾未能发现;肾创伤4例，其中3例为肾创伤，1例为后尿道创伤，静脉肾盂造影(ivp)能发现1例一侧肾输尿管未显影，见表1。表1 ctu与ivp对比研究结果进行t检验，代入公式，t=d-0sdn，sd=∑d2-(∑d)2/nn-1 , t=178.29，查表，t(0.01/2，59)=2.403，p<0.01，两种方法有明显差异性。ctu动脉期，右肾低密度挫伤灶ictu动脉期冠状位，右肾动脉无损伤，未行手术，保守治疗
讨 论
ct尿路成像结合平扫及增强后多期扫描，不仅可以观察尿路情况，而且可以观察泌尿系脏器病变及脏器的显影功能，及与周围结构的关系，主要应用于泌尿系结石、肿瘤、感染、尿路先天畸形、创伤、肾功能评价等。①泌尿系结石：无论x线阳性或阴性结石，ct尿路成像均能发现，而静脉肾盂造影(ivp)对于阳性结石较为敏感，阴性结石会出现漏诊，肠气有肠内容物较多时也会影像病灶的观察，有时也受人为和客观因素的影响。②泌尿系肿瘤：ctu尿路成像通过平扫及多期扫描对于泌尿系肿瘤的位置、定性具有较好的价值，而静脉肾盂造影(ivp)只能根据间接征像判断是否有肿瘤，有时泌尿系肿瘤没有侵犯尿路系统，静脉肾盂造影(ivp)可见异常表现。③感染：ctu尿路成像可以用于评价肾及肾盂感染性病变，并可显示病变范围，而静脉肾盂造影(ivp)只能通过肾盂、输尿管及膀胱显影评价。④创伤：ctu尿路成像经过注射造影剂后的肾实质期及排泄期多期扫描，不仅可发现肾实质的挫伤、撕裂伤、肾内、肾周血肿，而且可发现集合系统的损伤，静脉肾盂造影只能发现集合系统的损伤，ctu尿路成像动脉期cta扫描，可了解肾动脉受损程度，决定是否需要手术。⑤尿路畸形：可显示收集系统的变异和输尿管的解剖，因ct尿路成像可多平面重建得到三维图像，从而明确先天性畸形的精确类型，ct几乎可以确诊所有马蹄肾和盆腔肾;而静脉肾盂造影(ivp)只能显示较为常见的尿路畸形，对于较为复杂的尿路畸形显示欠佳，且受人为因素影响较大。
多层螺螺旋ct尿路成像(ctu)是伴随螺旋ct的发展而形成的一种新的检查手段，扫描时间短，空间、时间及密度分辨率较高，可评价尿路全部解剖细节，提高病变诊出率，与静脉肾盏造影(ivp)相比，对于泌尿系疾病诊断阳性率明显提高，完全可以部分取代静脉肾盏造影(ivp)。见图。
【参考文献】
1 成涛.msct诊断泌尿系疾病的价值研究.内蒙古民族大学学报,20xx:7.
2 杨晓霞.低剂量ctu对上尿路梗阻性疾病的诊断价值.临床医学实践杂志,20xx:11.
3 张辉.16层螺旋ct泌尿系统造影技术和应用.journal of rare disease,20xx:9.
4 stuart g.silverman.richard h.cohan.ct urography an atlas.
作者：柴洪波 任家庚 作者单位：513400广东清远连州市医院放射科
第十一篇 浅析HPLC_药学论文
【摘要】 目的建立兔含药血浆中黄芪甲苷含量快速测定的新方法。方法固相萃取法富集血浆中的黄芪甲苷;agilent -c18反相色谱进行分离;采用离子阱质谱多级反应模式，以m/z 807.5→627.1为选择离子对，内标法测定含量。结果血浆中黄芪甲苷的检测限为0.1ng/ml，线性范围为0.5～50.0μg/ml，平均方法回收率在96.3%～104.7%范围内。结论该方法具有灵敏度高、稳定性好和快速的特点，符合生物样品的要求，有望用于黄芪甲苷的药代动力学研究。
【关键词】 黄芪;黄芪甲苷;固相萃取;hplc-ms/ms
abstract: objectiveto establish a new method for the determination of astragaloside ⅳ in rabbit plaa by high performance liquid chromatography-ion trap mass spectrometry (hplc-ms/ms).methodsastragaloside ⅳ in plaa samples was enriched by solid phase extraction. the resulted samples were further separated by reverse phase chromatography with agilent -c18 column. multiple reaction mode of ms/ms was employed to determine the concentration of astragaloside ⅳ by internal standard with m/z 807.5→627.1 as the selected ion pair.resultsthe detection limit of astragaloside ⅳ in plaa samples was 0.1ng/ml, the linear range was 0.5-50.0μg/ml, and the average recovery rate of the method was within the range of 96.3%-104.7%. conclusionthe proposed method has the characteristics of high sensitivity, good stability and high speed. these properties can meet the requirements of the ytical method for biological samples, which indicates that the method may be used in pharmacokinetic study of astragaloside ⅳ.keywords: radix astragali; astragaloside ⅳ; solid phase extraction; high performance liquid chromatography-ion trap mass spectrometry (hplc-ms/ms)
黄芪为中医临床广泛应用的益气中药之一，味甘、性温，具有补气固表、脱毒和利尿等功效。wWw.meiword.com中华共和国规定临床所用黄芪药材为豆科植物蒙古黄芪astragalus membranaceus (fisch.) bge. var. mongholicus (bge.) hsiao或膜荚黄芪astragalus membranaceus (fisch.) bge.的干燥根[1]。黄芪甲苷为黄芪的主要有效成分之一，其含量测定方法主要包括薄层扫描法[2]和以紫外[3]和蒸发光散射[4]为检测方法的高效液相色谱法。由于黄芪甲苷为紫外末端吸收物质，上述方法虽能用于黄芪药材及制剂中黄芪甲苷的含量测定，但灵敏度方面难以满足生物样品中黄芪甲苷的测定要求。本文采用固相萃取法对兔含药血浆中的黄芪甲苷进行富集，高效液相色谱-质谱法(hplc-ms/ms)进行分离测定，旨在建立可用于黄芪甲苷药代动力学及在其他生物样品中含量测定的新方法。
1材料与方法
1.1药品与试剂黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所)，地高辛对照品(中国药品生物制品检定所)。黄芪药材购自陕西省中药材公司，经陕西省药品检验所鉴定为蒙古黄芪。乙腈(色谱纯，美国fisher公司)，水为超纯水(自制)，其他试剂均为纯。
1.2仪器agilent 1100系列液相色谱-离子阱质谱联用系统(含二元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、电喷雾离子化接口、离子阱质量器及agilent chemstation 5.2控制软件包)。alltech公司固相萃取仪;agilent c18固相萃取柱(500mg，6cc，美国安捷伦公司)。
1.3实验动物新西兰大白兔，♀、♂各半，体重1.8～2.3kg，由西安交通大学实验动物中心提供，动物合格证号：陕医动字第0820xx号。
1.4固相萃取柱的活化方法取安捷伦公司c18(500mg，6cc)固相萃取小柱安装于固相萃取仪上，依次用10ml甲醇、20ml超纯水、10ml 600ml/l甲醇溶液洗脱活化。
1.5供试品溶液的制备
1.5.1黄芪甲苷对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品5.0mg，置10.0ml量瓶中，用甲醇溶解并定容稀释至刻度，制备成浓度为0.5mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液。
1.5.2地高辛对照品溶液的制备精密称取地高辛对照品3.0mg，置5.0ml量瓶中，用甲醇溶解并定容稀释至刻度，制备成浓度为0.6mg/ml的地高辛储备液。
1.5.3黄芪药材的提取称取黄芪药材20.0g，干燥至恒重，粉碎，过40目筛，准确称取药材粉末100.0g，加10倍量甲醇，冷浸过夜，超声提取3次，每次30min，滤过，合并滤液，减压浓缩后制成干膏，研磨成粉，以羧甲基纤维素钠悬浮，备用。
1.5.4空白血浆样品溶液的制备取兔混合空白血浆0.5ml，加入地高辛对照品溶液10μl，置于2.0ml离心试管中，加入20μl浓度为10.0mol/l的三氯乙酸溶液，5000r/min离心5min，取上清液通过已活化好的固相萃取小柱，先用3.0ml水洗脱，再用2.0ml甲醇洗脱。收集甲醇洗脱液，40℃氮气吹干，残渣用流动相溶解，0.45μm有机滤膜过滤，冷藏备用。
1.5.5含药血浆样品的制备新西兰大白兔3只，12h禁食不禁水，以黄芪甲苷剂量为2.0mg/kg(相当于每公斤4.0g药材)灌胃给予黄芪药材提取液。分别于给药后0、10、30和60min耳缘静脉取血1.5ml，肝素抗凝，离心制备血浆。取血浆0.5ml，加入地高辛对照品溶液10.0μl，置于2.0ml离心试管中，加入20.0μl浓度为10.0mol/l的三氯乙酸溶液，5000r/min离心5min，取上清液通过已活化好的固相萃取小柱，先用3.0ml水洗脱，再用2.0ml甲醇洗脱。收集甲醇洗脱液，40℃氮气吹干，残渣用流动相溶解，0.45μm有机滤膜过滤，冷藏备用。
1.6条件色谱柱为agilent -c18柱(5μm，4.6mm×150mm);流动相为甲醇-5.0mmol/l乙酸水(75∶25，v∶v);流速为0.8ml/min;柱后2∶1分流，三分之一流出液进行质谱检测。质谱条件为：电喷雾正离子模式检测;雾化气压力为40.0psi;干燥气温度为325℃，流速为9.0l/min;黄芪甲苷选择m/z 807.4→627.2为离子对，地高辛选择m/z 803.5→m/z 785.1为离子对;质量扫描范围为100～1500amu。
2结果
2.1专属性和检测限精密吸取兔混合空白血浆0.5ml，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液。在拟定条件下，进样20.0μl，得提取离子流图(图1)。另取兔混合空白血浆3份，每份0.5ml，分别加入10.0μl地高辛对照品溶液和5.0μl黄芪甲苷对照品溶液，按空白血样样品制备方法制备供试品溶液，在拟定条件下，进样20.0μl，得提取离子流图(图2)。由图1和图2可见，采用多级反应模式，拟定条件下，血浆中的其他物质不干扰黄芪甲苷的测定。逐级减小空白血浆中地高辛和黄芪甲苷对照品溶液的添加量，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液，拟定条件下测得血浆中黄芪甲苷的检测限为0.1ng/ml(s/n=3)。图1空白血浆供试品溶液黄芪甲苷和地高辛提取离子流图fig.1 extract ion chromatogram of astragaloside ⅳ and digoxin in blank plaa
2.2线性范围取空白血浆8份，每份0.5ml，分别加入适量黄芪甲苷对照品溶液，使血浆中黄芪甲苷的浓度分别为50.0，25.0，12.5，5.0、2.5、1.0、0.5和0.05μg/ml，分别加入10μl地高辛对照品溶液，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液。在拟定条件下，分别吸取20μl，进样，测定黄芪甲苷和地高辛提取离子流图的峰面积。以两者峰面积的比值为纵坐标，黄芪甲苷的浓度为横坐标，进行回归。结果发现，在0.05～50.0μg/ml范围内，黄芪甲苷和地高辛提取离子流图峰面积的比值与黄芪甲苷的浓度呈非线性关系，但在0.5～50.0μg/ml却存在较好的线性关系。进一步在0.5～50.0μg/ml范围内，将黄芪甲苷和地高辛提取离子流图峰面积的比值与黄芪甲苷的浓度进行线性回归，得回归方程为y=0.02x+0.16，相关系数r=0.9994，提示血浆中黄芪甲苷的线性范围为0.5～50.0μg/ml。图2空白血浆加标供试品溶液黄芪甲苷和地高辛提取离子流图fig.2 extract ion chromatogram of astragaloside ⅳ and digoxin in blank plaa with addition of5μl astragaloside ⅳ and 10μl digoxin standarda：地高辛;b：黄芪甲苷。
2.3回收率
2.3.1提取回收率取空白血浆和水各3份，每份0.5ml，分别加入适量的黄芪甲苷对照品溶液和10.0μl地高辛对照品溶液，使空白血浆和水中黄芪甲苷的的浓度分别为为1.5、7.5和40μg/ml(高、中、低)，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液，进样20.0μl，测定黄芪甲苷含量。分别以血浆和水溶液中黄芪甲苷含量之比计算提取回收率，得高、中、低3个浓度黄芪甲苷的提取回收率分别为98.4%、101.2%和95.5%，提示黄芪甲苷具有较好的提取回收率。
2.3.2方法回收率分别精密吸取高、中、低3个浓度的空白血浆加标供试品溶液20.0μl，在条件下，进样，测定黄芪甲苷的含量。以测定量与加入量的比值计算方法回收率。结果发现黄芪甲苷的回收率分别为100.2%、96.3%和104.7%，提示方法具有较高的回收率。
2.4精密度实验分别取高、中、低3个浓度的空白血浆加标供试品溶液，在拟定条件下，1d内重复进样测定6次，测定黄芪甲苷的含量，计算得日内相对标准偏差分别为3.4%、6.7%和2.6%。将上述3个浓度的样品溶液分别在6d内连续测定6次，测定黄芪甲苷含量，计算得相对标准偏差分别为4.8%、6.3%和8.2%，表明方法具有良好的日内和日间精密度。
2.5稳定性试验
2.5.1冻融稳定性取添加有高、中、低3个浓度黄芪甲苷对照品溶液和10.0μl地高辛对照品溶液的空白血浆，在-20℃下冷冻24h，自然解冻后，按照空白血浆样品制备方法制备供试品溶液。拟定条件下，进样20.0μl，测定黄芪甲苷含量。然后将血浆样品重新冷冻24h，重复试验6次，计算冻融周期对黄芪甲苷稳定性的影响。结果发现，6个冻融周期对血浆中黄芪甲苷的测定无显著影响。
2.5.2短期稳定性取添加有高、中、低3个浓度黄芪甲苷对照品溶液和10.0μl地高辛对照品溶液的空白血浆，室温下放置2、4、6、8、10、12和24h后，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液。拟定条件下，进样，测定黄芪甲苷的含量。结果发现，样品在24h范围内稳定性良好。
2.5.3长期稳定性取添加有高、中、低3个浓度黄芪甲苷对照品溶液和10.0μl地高辛对照品溶液的空白血浆，在-70℃下冷冻贮存1、2、4、8周后解冻，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液。拟定色谱条件下，进样，测定黄芪甲苷含量，计算冷冻保存时间对稳定性的影响。结果发现，血浆样品-70℃下冷冻储存8周，对黄芪甲苷的测定无显著影响。
2.5.4后期稳定性取添加有高、中、低3个浓度黄芪甲苷对照品溶液和10μl地高辛对照品溶液的空白血浆，按空白血浆样品制备方法制备供试品溶液，室温下放置2、4、8、12、24和48h后，进样，测定黄芪甲苷含量。结果发现，血浆供试品溶液中黄芪甲苷在48h内稳定。
2.6样品测定分别取10、30和60min时间点采集的血浆样品，按含药血浆样品制备方法制备供试品溶液。拟定条件下，进样20μl，测定黄芪甲苷的浓度，结果表明，3个时间点所得含药血浆中黄芪甲苷的浓度分别为5.2、8.4和7.6μg/ml。
3讨论
黄芪甲苷的紫外吸收较弱，采用紫外检测法进行含量测定时，一般选择203nm，因此具有灵敏度差等不足，难以满足生物样品中黄芪甲苷的测定要求[5]。蒸发光散射检测器虽然能用于黄芪甲苷的测定，但对于生物样品而言，其灵敏度仍需进一步的提高。质谱法以气态离子为检测对象，检测灵敏度仅与检测对象的离子化程度密切相关，而不受其紫外光吸收性质的限制，在紫外末端吸收物质的测定方面具有独特的优势。因此，本文选择质谱法为手段，测定黄芪甲苷的含量。
已有文献报道采用高效液相色谱-飞行时间质谱测定黄芪甲苷在兔血浆中的浓度[5]，但给药对象为黄芪甲苷单体，且飞行时间质谱一般适用于大分子量物质的，对于黄芪甲苷而言，其选择性还值得进一步的探讨。本文采用离子阱质谱的多级反应模式即选择离子对法测定血浆样品中的黄芪甲苷。由于该方法同时以准分子离子和二级碎片离子对黄芪甲苷进行定性，因此能有效排除血浆中基质的干扰，从而不仅具有特异性强的特点，而且能有效缩短时间，提高灵敏度。综上，本文所建立的兔含药血浆中黄芪甲苷的hplc-ms/ms测定方法具有快速、稳定和灵敏度高的特点，能用于黄芪甲苷的药代动力学和组织分布研究。
【参考文献】
[1]国家药典委员会，中华共和国药典一部 [m]. ：化学工业出版社, 20xx:283-284.
[2]史宏妍. 薄层扫描法测定当归补血口服液中黄芪甲苷含量 [j]. 药物鉴定，20xx, 19(7):29.
[3]林晓莲，林丽君，张尚斌. 高效液相色谱法测定复方黄连液中黄芪甲苷的含量 [j]. 长春中医药大学学报, 20xx, 26(1):128-129.
[4]qi lw, yu qt, li p, et al. quality evaluation of radix astragali through a simultaneous determination of six major active isoflavonoids and four main saponins high-performance liquid chromatography coupled with array and evaporative light scattering detectors [j]. j chromatogr a, 20xx, 1134(1-2):162-169.
[5]贾晓斌，陈彦，蔡宝昌，等. hplc-ms(tof)法测定家兔血浆中黄芪甲苷的浓度 [j]. 中成药, 20xx, 27(3):323-325.
第十二篇 丰汇FH-400全自动生化分析仪质控分析_临床医学论文
丰汇fh-400全自动生化仪质控
【关键词】 丰汇fh-400全自动生化仪 质控
（声明：本站文章仅给需要的医务工作者提供交流学习参考。上文库免费提供。部分资源由工作人员网上搜索整理而成，如果您发现有哪部分资料侵害了您的版权，请速与我们后台工作人员联系，我们将即时删除。客服:88970242.后台工作：928333977）
全自动生化仪的应用使原先手工操作的多个环节实现了机械化和自动化，提高了工作效率。而全自动生化仪的iqc和eqc水平很大程度上决定于质控水准。仪的性能正确的操作和良好的维护保养，使仪器处于最佳的工作状态。其中质控尤其重要。
资料与方法
仪器：fh-400全自动生化仪。普通冰箱，水浴箱，离心机。质控物：罗氏定值质控血清。试剂：上海丰汇生物技术有限公司。上机前：前质控非常重要，易出现标本采集错误。标本张冠李戴。标本上机前血清纤维蛋白未完全析出等。
正确掌握采血时间对各生化成分的影响：检测结果应标明获取标本的时间。是空腹采血还是若干小时采血。采血时要注意操作要领，正确掌握理解止血带的作用和时间。抽血过程要尽量迅捷，抽取中要及时去掉止血带以免影响标本质量。注意标本分离的时间。wWw.meiword.Com分离过早，纤维蛋白在血清中未能完全析出。分离晚，易使rbc的纤维物质交换，影响将测结果的准确性。分离好的血清应有足够的量，否则应用专用样品杯，杯中注意不能有气泡，漂浮物，纤维蛋白等。
仪器：仪器准备：各种试剂应足够当天预期标本量的检测。原则上不允许仪器运行中添加试剂。以免因试剂引起系统误差，中间添加试剂应及时定标，检查各种清洗剂的余量。不足将会造成仪器各种清洗不彻底而引起系统误差。保证有足量的合格的纯水供应，水质将直接影响检查检测结果的准确性。
试剂技准：对已准备好的试剂进行技准并测定空白，确定其在说明书要求的范围内，失效的试剂应弃用。
室内质控：室内质控应严格遵守与当天工作现象条件一致的原则，每天质控品随标本一同检测。失控的要及时查找原因，立刻纠正并做好失控记录。
及时处理一起和提示：样品量不足，撞针，空标超限，样品空缺或项目不全。出现过高或低的异常结果，应稀释重做。
结 果
fh-400全自动生化仪的检测结果必须由经验丰富的专业人士严格审核。双签字方能发出。监测数据过低或空白时，应立即查找原因，重复纠正。一般原因是样品量不足或加样针堵塞引起的。有的标本在线性范围之外、光镜老化和比色杯污染也可引起。阳性结果过多时要结果间相关性。及时与临床联系复查。特殊标本如肪血，谤血应在报告并上注明。
讨 论
检验要得到准确可靠的结果。必须严格按照全面质量管理体系的要求。严格做好空间质控。质控不可能消除误差，而只能将误差控制在允许的范围内。全自动生化仪的质控贯穿于整个检测工作的始终。工作人员必须有高度的责任心和质控意识。严守操作进程、把好检测的每一个关口，才能提高实验室的水平，保证每一份报告单准确、可靠，为临床提供可靠的帮助。
【参考文献】
1 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[m].南京:东南大学出版社,20xx.
2 任建民,孙恒寿.全自动生化仪质量控制的探究.
作者：蒋 斌 孙新华 作者单位：226241江苏启东市第二医院检验科
第十三篇 浅析CD83、CD1a标记肿瘤浸润性树突状细胞在大肠癌中的表达及其预后意义_药学论文
【关键词】 大肠癌;肿瘤浸润性树突状细胞;cd83;cd1a
abstract: objectiveto explore the expression of tumor-infiltrating dendritic cells (tidc) in colorectal carcinoma and its prognostic significance. methodsthirty cases of colorectal cancer patients were selected from ≥5-year survival group and <3-year death group, respectively. immunohistochemical staining and flow cytometry were used to detect the expression of cd83 and cd1a of tidc in colorectal cancer tissues; the relationship of the expression with clinico- pathological features and prognosis of colorectal cancer were yzed.resultsthe expression of cd83 and cd1a had no correlation with differentiation degree of colorectal cancer, lymph node metastasis, dukes staging or prognosis. immunohistochemistry showed that 19 patients with cd83 positive expression and 24 with cd1a positive expression were detected in 60 cases of colorectal cancer, the expression of cd83 and cd1a decreased with dukes staging increase; the expression was significantly higher in ≥5-year survival group than in <3-year death group (p<0.05). flow cytometry detected low level of cd83 (60/60), cd1a (60/60), and ki-67 (60/60) expressions. during different dukes staging of colorectal carcinoma tissues, cd83 and cd1a had a significantly higher expression in a + b phase of colorectal cancer tissues than in c + d phase (p<0.05). cd1a had a significantly higher expression in ≥5-year survival group than in <3-year death group (p<0.05 ).conclusionthe expression of cd83 and cd1a, tidc characteristic markers in colorectal carcinoma, is related with and the prognosis; therefore, it can be used as a reference indicator to detect the prognosis of colorectal carcinoma.
key words: colorectal carcinoma; tumor-infiltrating dendritic cell; cd83; cd1a
树突状细胞(dendritic cell, dc)是目前所知机体内功能最强的抗原提呈细胞，是机体免疫应答的始动者.肿瘤组织内浸润性树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cell, tidc)的数量与功能对机体免疫有重要提示意义，与肿瘤的临床分期和预后相关[1]。WwW.meiword.CoMtidc被认为是机体对肿瘤的一种局部免疫反应。cd83和cd1a是鉴定人外周血中dc的最好标志。本研究采用免疫组化和流式细胞术分别检测大肠癌组织中cd83和cd1a的表达情况，二者与大肠癌临床病理特点和预后的关系，进而了解肿瘤组织局部免疫状况对预后的影响。
1材料与方法
1.1标本来源收集遵义医学院附属医院普外科自1990年6月至20xx年6月经病理确诊的60例大肠癌石蜡标本，均为原发病灶(临床资料完整)，男41例，女29例，年龄26～78(中位数52)岁;高分化30例，中分化9例，低分化21例;dukes分期：a期6例，b期25例，c期21例，d期8例;伴有淋巴结转移14例，无淋巴结转移46例;≥5年生存者30例，<3年死亡者30例。所有患者均为第一次手术，术前未经任何放化疗，随访至术后5年以上(随访资料完整)。
1.2主要试剂cd83单克隆抗体(hb15a：sc-19677)、cd1a单克隆抗体(gm357101/02/04)、envision试剂盒(二抗、三抗试剂)均购于上海基因科技有限公司。流式细胞仪(facs calibur，becton dickinson, usa)，pe标记的抗cd83抗体、apc标记的抗cd1a抗体，均为美国bd公司产品。
1.3免疫组化染色采用sabc法检测操作流程，具体操作步骤按照说明书进行。以试剂公司提供的阳性切片为阳性对照,以pbs代替一抗作为阴性对照。判定结果：cd83、cd1a均定位于胞膜或胞浆。以细胞膜、细胞浆或细胞核呈棕黄色颗粒为阳性。光镜下切片按统一放大倍数(×400)，选肿瘤区阳性表达最强的5个高倍视野，数码拍照，输入图像软件image-pro plus 6.0中，准确分割出阳性区域，测量单位光学密度值(mean density)。相同条件下，每个图片测量3次，以所得3个光密度值的均数作为该图片视野中cd83、cd1a的表达强度。以同一切片的5个视野各自测得的平均光密度值的均数作为该切片所代表的单样本的cd83、cd1a的表达强度。
1.4流式细胞术测定取10g标本，经脱蜡、水化、胰蛋白酶37℃恒温水浴震动消化30min，300目尼龙网过滤，生理盐水10min离心2次(500～800r/min)，去除细胞碎片。沉淀细胞pbs重悬并计数，取106个细胞，加入流式细胞检测管，离心弃上清，分别加入抗cd83-pe抗体、抗cd1a-apc抗体，混匀后室温避光孵育30min，1ml pbs稀释，离心弃上清，加固定液150μl上机检测。
1.5统计学处理采用spss13.0统计软件，采用χ2检验，以p<0.05为差异有统计学意义。计量资料的均数比较采用样本的t检验，以p<0.05为差异有统计学意义。
2结果2.1大肠癌组织中tidc的cd83和cd1a表达60例大肠癌组织进行免疫组化检测，cd83阳性表达19例。各标本间阳性细胞分布不一，肿瘤细胞间(图1a)或肿瘤边缘正常组织(图1b)中均有散在分布，胞体较大，圆形。cd1a阳性表达24例。胞体较大，圆形，阳性细胞散在分布于癌巢内(图1c)、肿瘤周边及正常组织之间(图1d)，以癌巢组织区域分布较多。60例大肠癌组织经流式细胞仪均检测到cd83和cd1a表达(图2a、图2b)。cd83表达范围在0.06%～3.98%。cd1a表达范围在0.33%～9.45%。图1cd83及cd1a在大肠癌组织及边缘组织中的表达 fig.1 cd83 and cd1a expressed in colorectal cancer tissues and the edge(dab, ×200)a：大肠癌组织cd83表达;b：大肠癌组织边缘cd83表达：c大肠癌组织cd1a表达：d大肠癌组织边缘cd1a表达。图2cd83及cd1a在≥5年生存组及<3年死亡组大肠癌组织中的表达fig.2 cd83 and cd1a expressed in colorectal cancer tissues of ≥5-year survival group and<3-year death groupa：≥5年生存组大肠癌组织cd83、cd1a表达;b：<3年死亡组大肠癌组织cd83、cd1a表达。
2.2大肠癌组织中tidc的cd83和cd1a表达与临床的关系cd83和cd1a的表达与大肠癌患者分化程度、淋巴结转移无明显关系，与dukes分期、预后相关。免疫组化检测显示(表1)，cd83和cd1a在a期+b期大肠癌中表达均高于c期+d期组，差异有统计学意义(p<0.05);≥5年生存组表达高于≤3年死亡组，差异有统计学意义(p<0.05)。流式细胞术检测显示，cd83在a期+b期大肠癌组织中的表达高于c期+d期组(t=2.916，p<0.05);cd1a在a期+b期大肠癌组织中的表达高于c期+d期组(t=2.747，p<0.05)，cd1a在≥5年生存组表达高于≤3年死亡组(t=3.713，p<0.05)。表1免疫组化测试cd83、cd1a表达与大肠癌临床病理的关系。
3讨论
肿瘤抗原是诱导细胞免疫反应的一个关键性调控步骤，dc是目前所知机体内功能最强的抗原提呈细胞，是机体免疫应答的始动者。其提呈抗原的能力比腹腔巨噬细胞和b细胞至少强10倍。dc在大肠癌发生、发展中有重要作用，其浸润密度在一定程度上反映了机体抗肿瘤免疫强度[2]。研究表明同源结肠癌患者外周血dc和t淋巴细胞共孵后能增加t淋巴细胞的活性[3]，并且可以抑制裸鼠体内移植瘤的生长[4]。cd83是人成熟dc的主要特征性标志，其激活淋巴细胞功能最强[5]，由于成熟dc的低水平表达，不能使肿瘤抗原引起有效免疫应答，从而诱导了t细胞的无能状态，使得机体的免疫系统不能将肿瘤细胞清除，是肿瘤无限制性生长的原因之一[6]。研究显示大肠癌中cd83表达与患者临床分期和预后显著相关[7]。cd1a是一种提呈脂类抗原的分子，已广泛应用于dc分离、纯化和体外培养的鉴定。结直肠癌中具有cd1a标记的tidc浸润程度与患者生存期相关[8]。研究显示体外诱导、培养人外周血单核细胞获得的未成熟dcs中度表达cd1a，在dcs的成熟期cd83分子有高水平表达[9]。因此，通过对cd83、cd1a的检验，可评价tidc在大肠癌病灶中的浸润密度和功能状况，进而了解患者机体免疫状况及其对预后的影响。
本研究发现，大肠癌组织中cd83和cd1a标记的tidc与dukes分期密切相关，dukes分期早的肿瘤组织中浸润程度高，易激活机体产生有效地抗肿瘤免疫，预后较好。≥5年生存组的大肠癌组织中cd83和cd1a表达较<3年死亡组的大肠癌组织中cd83和cd1a表达高，二者表达高的大肠癌患者预后好，与文献一致。提示cd83和cd1a标记的tidc可以作为判断大肠癌预后的参考指标使用。但fcm结果显示，大肠癌组织cd83有低水平表达，且≥5年生存组和<3年死亡组间表达无统计学差异。这可能是由于大肠癌组织中成熟dc较少和/或本研究的样本例数少有关，有待进一步研究。
目前利用cd1a标记tidc存在缺陷，cd1a只能代表tidc其中的一个亚型，本研究分别检测tidc的标记物cd1a和cd83并不能反映局部癌组织中的全部tidc。下一步在研究大肠癌组织中tidc浸润数量与预后的关系时，应进一步寻找tidc的特征性标志，增加tidc计数的准确性，对大肠癌患者的预后能做出更好的判断。
【参考文献】
[1]atreya i, neurath mf. immune cells in colorectal cancer: prognostic relevance and therapeutic strategies [j]. expert rev anticancer ther, 20xx, 8(4):561-572.
[2]engleman eg. dendritic cell-based cancer immunotherapy [j]. sermin oncol, 20xx, 30 (8):23-29.
[3]焦保庭，杨伟明，宋辉，等. 自体肿瘤抗原修饰的树突状细胞活化t淋巴细胞的杀瘤效应 [j]. 郑州大学学报：医学版, 20xx, 42(6):1094-1096.
[4]贺子彪，杨伟明，焦保庭，等. 树突状细胞对裸鼠结肠癌移植瘤的抗癌效应 [j]. 西安交通大学学报：医学版, 20xx, 30(1):60-62.
[5]yilmaz t, gedikoglu g, celik a, et al. prognostic significance of langerhans cell infiltration in cancer of the laryax [j]. o to laryngol head neck surg, 20xx, 132(2):309-316.
[6]rouard h, leon a, klonjkowski b, et al. adenoviral transduction of human 'clinic grade' immature dendritic cells enhances costimulatory molecule expression and t-cell stimulatory capacity [j]. j immunol method b, 2000, 241(1-2):69-81.
[7]inoue y, nakavama y, minaqawa n, et al. relationship between interleukin-12-expressing cells and antigen-presenting cells in patients with colorectal cancer [j]. anticancer res, 20xx 9-10, 25(5):3541-3546.
[8]naqorsen d, voiqt s, berq e, et al. tumor-infiltrating macrophages and dendritic cells in human colorectal cancer: relation to local regulatory t cells, systemic t-cells, systemic t-cell response against tumor-associated antigens and survival [j]. j transl med, 20xx, 1129?;5:62.
[9]侯治富，郭楠，高申，等. 人外周血树突状细胞的诱导与鉴定 [j]. 吉林大学学报(医学版), 20xx, 31(5):657-660.
第十四篇 浅谈双气囊内镜在不明原因腹痛病因诊断中的应用_药学论文
【摘要】 目的探讨双气囊内镜(double-balloon endoscopy, dbe)在不明原因腹痛病因诊断中的应用价值。方法选择42例不明原因腹痛患者行dbe检查，对结果进行总结，并对发现阳性病灶的患者进行6～12个月的随访。结果以最终随访结果为诊断依据，本组患者中dbe的诊断阳性率为50%(21/42)。检出病灶以非特异性炎症最多，占45.8%(11/24)。结论dbe检查对明确不明原因腹痛的病因具有重要指导意义。
【关键词】 不明原因腹痛;双气囊内镜;病因诊断;小肠疾病;随访
abstract: objectiveto explore the value of double-balloon endoscopy (dbe) in the diagnosis of unexplained abdominal pain.methodstotally 42 patients with unexplained abdominal pain were examined by dbe and the results were yzed. the patients who were found to have lesions were followed up for 6 to 12 months.resultased on the final follow-up results, dbe showed that the diagnosis rate of patients with unexplained abdominal pain in this group was 50% (21/42). non-specific inflammatory lesions were detected most, accounting for 45.8% (11/24).conclusiondbe examination in this study has a great guiding significance in clarifying the etiology of unexplained abdominal pain.
key words: unexplained abdominal pain; double-balloon endoscopy; etiological diagnosis; all bowel disease; follow-up
不明原因腹痛的部分病因源于小肠，但小肠具有弯曲及游离度大的特点，常规小肠疾病检查方法，如小肠钡剂造影、ct扫描等因其各自的局限性使许多疑似小肠源性腹痛患者很难获得临床确诊。WWw.meiword.cOm已有的报道对疑似小肠源性腹痛的诊断阳性率及疾病谱不尽一致。本研究通过双气囊内镜(double-balloon endoscopy, dbe)检查42例疑似小肠源性腹痛者并进行，探讨dbe的病变检出率以及经随访后的确诊率，以期明确dbe在疑似小肠源性腹痛诊断中的价值。
1材料与方法
1.1病例资料选择20xx年5月至20xx年12月在本院就诊，疑似小肠源性腹痛的42例患者，进行了dbe检查，其中男24例，女19例，年龄(37±18)岁。本组患者均为经胃镜、结肠镜、小肠钡餐造影、腹部及盆腔影像、血液生化等检查未能确诊者。
1.2仪器富士能en-450 p5型dbe，包括内镜和外套管两部分，内镜顶端有可装卸的气囊，充气后直径2.5cm;外套管气囊充气后直径5cm，两只气囊充气后压力均为6.5～7.5kpa(1mmhg=0.133kpa);气囊充气及放气由专用气泵控制。
1.3方法拟经口进镜者，检查前需禁饮食12h以上;拟经肛进镜者，检查前需行肠道清洁准备。在丙泊酚静脉麻醉、全程吸氧、持续心电监护及严密观察生命体征情况下行dbe检查。由双人配合操作，术者和助手利用双气囊交替充气、放气，内镜和外套管相对滑动反复推送及牵拉进镜。检查方式包括经口侧进镜或经肛侧进镜，怀疑空肠疾病可选择经口侧进镜，怀疑回肠疾病可选择经肛侧进镜，病变部位难以判断则选择经口侧进镜。若单侧进镜未发现可解释临床症状的病灶时，于进镜终止处可用亚甲蓝作黏膜下注射标记，作为从另一侧进镜时汇合的标记。操作中我们体会，经口途径比较容易，耗时较少;而经途径尤其从盲肠进入回肠时难度较大，此时在一定力度下压右下腹或脐周位置，可辅助有效进镜。
2结果
2.1一般情况本组患者中，除1例因肠粘连仅经口进镜至空肠中段外，其余均顺利完成检查，其中经口腔途径检查26例，均插镜至回肠中下段;经途径检查13例，均插镜至空回肠交界处或空肠中下段。分别从两端进镜3例，完成了全小肠检查。平均单侧检查时间(47±18)min。检查过程除了咽喉损伤、小肠黏膜擦伤外无严重并发症发生。术后有一过性腹痛、腹胀者(发生率1.5%)，经解痉对症治疗后均获缓解。
2.2小肠病变检出结果42例疑似小肠源性腹痛患者中有24例检出病灶，总体阳性率为57.1%(24/42)。其中小肠非特异性炎症(包括溃疡样病灶在内)11例(45.8%，11/24)，克罗恩病5例(20.8%，5/24)，肠粘连2例(8.3%，2/24)，息肉2例(8.3%，2/24)，非霍金淋巴瘤、寄生虫、过敏性小肠炎、嗜酸粒细胞浸润性肠炎各1例(各占4.8%，1/24)。24例检出病灶的患者给予相应的治疗，以腹痛症状缓解或消失作为是否有效的标识。随访6～12个月后24例患者中有21例治疗有效，病灶缓解率为87.5%(21/24)。无效的3例患者中，1例为肠粘连，有反复腹部手术史，2例为小肠非特异性炎。对这3例患者仍在随访中，尚需进一步明确病因。剔除经治疗无效的3个病例，以随访的最终结果为诊断依据，42例疑似小肠源性腹痛患者的dbe检查阳性率为50%(21/42)。24例被dbe检出阳性病灶者，有21例予以组织活检，4例有明确的病理结果，分别为息肉(2例)，非霍金淋巴瘤(1例)及嗜酸粒细胞浸润性肠炎(1例);其余活检病理均回报为“小肠黏膜慢性炎症改变”。
3讨论不明原因腹痛经实验室检查、影像和胃肠镜等常规检查，其诊断率不超过40%[1-2]，而小肠源性被认为是不明原因腹痛的主要原因之一[3]。胶囊内镜的使用为小肠疾病的诊断提供了一个全新的检查手段，但不能反复观察病变，无法进行活检定性和治疗，尚存在一定的局限性。在为数不多的报道中，胶囊内镜对不明原因腹痛病变的检出率仅为17.86%(5/28)[4]。
目前，关于dbe在疑似小肠源性腹痛诊断价值的几项报道中，病变检出率分别为31.8%(21/66)，43%(6/14)和61.5%(24/39)[5-7]。本研究的结果显示，dbe在疑似小肠源性腹痛的病变检出率为50%(21/42)，与已有报道基本一致;检出比例最高的病变为小肠非特异性炎症(45.8%，11/24)，而已报道的结果以憩室居多;其次为克罗恩病(20.8%，5/24)、肠粘连(8.3%，2/24)及息肉(8.3%，2/24)，其中1例非霍金淋巴瘤及2例克罗恩病行手术治疗，2例空肠息肉患者行镜下息肉高频电凝切术，除去3例腹痛未获缓解的患者，其余患者经随访均获得较好疗效，表明dbe对不明原因腹痛有一定的诊断和治疗价值。
本组患者中有3例选择双侧进镜，均为阳性结果，而18例阴性患者由于经济或其他原因，只完成单侧途径的小肠镜检查，可能会影响对小肠病变的检出率。故一侧进镜未发现阳性病灶者，推荐另侧进镜检查，以免造成病变遗漏。本研究尚有1例未纳入病例，因腹痛位于脐周，疑为小肠源性而行dbe检查，结果为结肠癌，故须仔细排除上消化道和结肠的病变后尚可行dbe检查。
因为同一性质的病变可能会在小肠有多处分布，且有不同的镜下形态表现，如本组病例中有2例克罗恩病，溃疡及隆起病灶呈阶段性分布，所以在发现可解释临床症状的小肠病灶后，在静脉麻醉状态下，受检患者耐受良好，推荐继续进镜至小肠最深可位，以获取更全面的内镜资料。
本组42例患者中，有6例患者曾行胶囊内镜检查，均发现可疑病灶，有4例与dbe检查结果一致，符合率达到66.7%。因病例数尚少，还无法对二者的诊断符合率提供结论性意见。但是，对于dbe检查前无法明确的病灶位置，胶囊内镜有一定的指导意义，可引导经口腔或经进镜。目前，尚有待于继续积累病例，并可与其他小肠检查方法进行前瞻性及随机性对照研究，以证实dbe是否可作为不明原因腹痛诊断中首选的检查方法。对于因经济原因只能行胶囊内镜或dbe单项检查的患者，首选dbe可能比较合适。
我们的组织活检，除4例有明确病理回报外，其余均为“慢性炎症”，对临床诊断缺乏指导意义;尤其是小肠溃疡样病变，需要结合临床综合考虑，必要时行手术治疗，以对克罗恩病、淋巴瘤，或是特发性溃疡进行鉴别;对诊断为“非特异性小肠炎症” 且无明确手术指征的患者，我们予以美沙拉嗪(商品名颇得斯安)口服治疗，经随访腹痛症状均有不同程度缓解。氨基水杨酸类药物可改善小肠黏膜炎症，用于炎症性肠病的治疗，但是否可作为非特异性小肠炎症的治疗推荐用药，仍需进一步积累病例并加强随访观察。
本研究结果表明dbe对疑似小肠源性腹痛的诊断具有重要的临床价值，但本组病例中仍有50%未获得明确诊断。新的检查手段,尤其dbe使小肠疾病的诊断已经有了很大的进展,但仍需各种检查手段如常规内镜检查、小肠气钡双重造影及胶囊内镜的综合使用,互相补充,才可有效提高临床确诊率。
【参考文献】
[1]procel a, alacin g, moreno m, et al. value of laparoscopy in ascites of undetermined origin [j]. rev esp enferm dig, 1996, 88(7):485-489.
[2]lankisch pg, gaetke t, gerzmann j, et al. the role of enteroclysis in the diagnosis of unexplained gastrointestinal symptoms: a prospective assesent [j]. z gastroenterol, 1998, 36(4):281-286.
[3]zhong j, ma t, zhang c, et al. a retrospective study of the application on double-balloon enteroscopy in 378 patients with suspected all-bowel diseases [j]. endoscopy, 20xx, 39(3):208-215.
[4]gomez rodriguez bj, ortiz moyano c, romero castro r, et al. diagnostic yield of 335 push video-enteroscopies [j]. rev esp enferm dig, 20xx, 98(2):82-92.
[5]曾志荣，张芳宾，高翔，等. 双气囊小肠镜对不明原因腹痛病因诊断的价值 [j]. 中山大学学报：医学科学版, 20xx, 29(4s):95-96.
[6]zhi fc, yue h, jiang b, et al. diagnostic value of double balloon enteroscopy for all-intestinal disease: experience from china [j]. gastrointest endosc, 20xx, 66(3s):s19-s21.
[7]钟良，钱立平，刘懿，等. 双气囊小肠镜在68例小肠疾病诊断中的价值 [j]. 中华消化杂志, 20xx, 26(6):386-389.
第十五篇 肺原发性淋巴瘤的影像学诊断(附2例报告及文献复习)_临床医学论文
作者：李志丹 晖 作者单位：721400陕西凤翔县医院放射检查科ct室
【摘要】 目的：探讨肺原发性淋巴瘤的x线及ct表现，提高对肺原发性淋巴瘤的认识。方法：回顾性本院经病理证实的肺原发性淋巴瘤2例，并文献复习，对肺原发性淋巴瘤的临床诊断标准、影像学表现及病理分型进行讨论。结果：肺原发性淋巴瘤罕见，与继发性淋巴瘤有明显的不同，其临床有严格的诊断标准。影像学分型：①结节肿块型；②肺炎肺泡型；③间质型(支气管、血管、淋巴管型)；④粟粒型(血型)。病理分为非何杰金淋巴瘤(nhl)和何杰金淋巴瘤(hd)两大类，以nhl多见，又分为以下几类：①起源于支气管相关淋巴组织(balt)的低度恶性小b细胞淋巴瘤；②高度恶性大b细胞淋巴瘤；③血管中心性淋巴瘤；④其他如血管内淋巴瘤(ivl)等。结论：肺原发性淋巴瘤罕见，其影像学表现无特异性，但某些征象结合临床资料对本病的诊断有一定的价值，确诊依赖于病理检查。
【关键词】 淋巴瘤 肺原发性 影像诊断
原发性肺淋巴瘤是较为罕见的结外型淋巴瘤［1］。wWW.meiword.com临床及影像学表现缺乏特异性，故临床上误诊率高，误诊时间长，如何提高其早期诊断与治疗水平是临床与影像学医师面临的一个重要课题。本文报告2例(其中1例曾报告过)经我院临床及在ct导向下经皮肺穿刺切割活检病理学证实的肺原发性淋巴瘤，并文献复习，以期提高其影像学诊断水平。
资料与方法
2例病例均经穿刺活检证实，男1例，女1例，年龄分别为50岁与56岁。1例(女性)偶有气短、咳嗽、胸痛，病史5年。另1例(男性)无自觉症状，经查体发现，病史4年。2例均做胸片和ct检查。ct扫描仪为美国ge ct prospeed fⅱ螺旋ct机，常规扫描层厚10mm，层距10mm，薄层扫描层厚1mm。
结 果
本组2例x线及ct表现：肺炎型1例，表现为两肺多发大片肺段或肺叶性实变影，体积大致正常，其内可见支气管气相及空泡征，支气管腔无明显狭窄，走行自然，右侧少量胸腔积液。间质型1例，表现为肺纹理增多、紊乱，两中上肺野多发局限性透光度减低，呈毛玻璃样改变，ct呈现多发网状增厚间隔内淡薄渗出性影(毛玻璃状)，右上肺段性较实变影伴支气管气相。2例均未见纵隔肺门淋巴结肿大。
例1胸部正位片示：两肺中下野多发大片实变影，可见支气管气相，右侧少量胸水。胸部双层螺旋ct平扫示：两肺上中下叶多发大叶性/节段性实变影，其中可见支气管气相或空泡征。右侧少量胸水。纵隔、肺门未见肿大淋巴结。
例2胸部正位片示：两肺上野片状毛玻璃样影，右侧水平裂增厚。胸部双层螺旋ct平扫示：两肺多发片状毛玻璃样影，右上肺节段性实变影，其中见支气管气相，肺纹理增重、紊乱，病灶呈粗网状影。纵隔、肺门未见肿大淋巴结。
讨 论
肺淋巴瘤根据发病部位和病因不同可分为原发性、继发性及免疫缺陷相关性3类［2］。原发性淋巴瘤仅表现为肺的淋巴结浸润而不伴其他部位的淋巴结病变，临床极为罕见。占全部淋巴瘤的0.36%～1.2%。病理上分为非何杰金淋巴瘤(nhl)和何杰金淋巴瘤(hd)两大类，大部分是nhl，又分为以下几类：①起源于支气管相关淋巴组织(balt)的低度恶性小b细胞淋巴瘤，本文2例皆属此类；②高度恶性大b细胞淋巴瘤；③血管中心性淋巴瘤；④其他如血管内淋巴瘤(ivl)等。绝大多数肺原发性淋巴瘤有病程长、发展慢、症状轻等特点。本组2例，1例确诊时病变已5年，另1例已4年。
临床诊断原发性肺淋巴瘤有严格的标准［3］：①影像学上显示肺及支气管受累，但未见纵隔淋巴结肿大。②以前从未发生过胸外淋巴瘤。③通过临床检查，白细胞计数、ct或淋巴管造影及骨髓穿刺等检查，排除了胸外淋巴瘤或淋巴细胞白血病。④发病后3个月仍未发现胸外淋巴瘤的征象。同时满足了上述4点可诊断为原发性肺淋巴瘤。本组2例均符合上述条件。
综合文献［1～4］：原发性肺淋巴瘤的影像学表现无特异性，大致分为以下4种类型：①结节肿块型；②肺炎肺泡型(实变型)；③间质型(支气管、血管、淋巴管型)；④粟粒型(血型)。结节肿块型最常见，单发或多发，分布于肺野内带或胸膜下，边缘模糊，可见支气管气相，部分病灶可见空洞或液气平面。肺炎肺泡型为沿肺段或肺叶分布的模糊片状影，可见支气管气相或空洞。间质型表现为弥漫分布的细小或粗网状结构或网状结节影，或呈毛玻璃样改变。粟粒型呈直径<1cm的多发结节，边缘毛糙。多数病例有多型表现。本组1例为多发肺炎肺泡型，另1例为间质型为主伴肺炎肺泡型，此实变影为间质型进展的结果(其中见粗糙网状影)。
原发性肺淋巴瘤影像学表现多样，无特异性，需和肺内其他常见或少见疾病鉴别［4～6］：如大叶性肺炎、小叶性肺炎、结节病、肺炎型细支气管肺泡癌、肺霉菌病、特发性间质性肺炎、恶性组织细胞增生症、非淋巴瘤性淋巴结组织增生性疾病等。最后确诊需靠穿刺活检或手术病理诊断。
【参考文献】
1 上官宗校,周建英.原发性肺恶性淋巴瘤的研究进展.国际呼吸杂志,20xx,26(2):117-121.
2 张永柱,朱雨迥,张晓.原发性肺淋巴瘤影像学诊断.滨州医学院学报,20xx,5.
3 吴宁,李杰,林冬梅,等.肺罕见恶性肿瘤的影像表现.临床放射学杂志,20xx,2:117-142.
4 上海第一医学院《x线诊断学》编写组.x线诊断学.第1册.胸部.上海:上海出版社,1976:118-119.
5 潘克锓,刘晓红,常占平,等.读片窗-肺淋巴瘤样肉芽肿病.临床放射学杂志,20xx,1:5-6.
6 曹丹庆,蔡祖龙.全身ct诊断学.:军医出版社,1998:400-401.
（声明：本站文章仅给需要的医务工作者提供交流学习参考。上文库免费提供。部分资源由工作人员网上搜索整理而成，如果您发现有哪部分资料侵害了您的版权，请速与我们后台工作人员联系，我们将即时删除。客服:88970242.后台工作：928333977）
第十六篇 浅析自我药疗中不合理用药现象_药学论文
药物具有双重性，既有治疗作用，同时也存在一定的不良反应。由于知识不足导致诸多的不合理用药，其危害在于增加药物的不良反应，损害健康，浪费金钱，甚至延误治疗，引发进一步的严重后果(1-2)。
1 用药不对症
肚子痛用什么药？是止痛药、止泻药、消炎药还是胃药，其实擅自用哪一种都可能是错误的选择。要知道，腹痛的原因有数十种，缺乏医学专业知识的普通百姓，不会判断自己腹痛的病因，不能做到对症用药。同理，有些人仅凭一知半解或“久病成医”，或听别人的用药“经验”，不经诊断，未弄清楚病因和药物的适应症时就随意用药。这种不合理用药发生率最高，对健康的危害也最大。要知道许多症状可能相同或相似，其病因却不相同，治疗方法也更是迥然不同。用药不对症，不仅不能治愈疾病，而且还会延误原有疾病的正常治疗，甚至会因为所用药物的不良反应而增添药源性疾病。
2 用药时机不对
从大的方面来看，首先应在疾病的不同阶段运用不同的治疗手段，以乙肝治疗为例，许多人认为，一旦感染了肝病毒，就应立即用抗病毒药物来治疗。WwW.meiword.Com但有研究表明，过早地使用抗病毒药物治疗乙肝，效果并不好(3)。其原因：①体内没有病毒复制时，使用抗病毒药是无效的。②体内免疫细胞处于麻痹状态时，使用抗病毒药物治疗效果较差。③不考虑病情，过早地使用抗病毒药物治疗，往往可增强乙肝病毒对药物的耐受性，或使病毒发生变异。④过早地使用抗病毒药物，并不能起到防止肝脏发生纤维化的作用。可见，用药时机要正确掌握，不能想当然，在遵医嘱或者阅读药品说明书的基础上，若有疑问，应主动咨询医师和药师。
3 随意增减药物剂量
有的人治病心切，认为药吃得越多，病好的快，便随便加大剂量；有的人又经常忘服、漏服药，问其原因，回答是病情有好转，就不把吃药放在心上了。
所周知，药物服用的剂量是通过长期临床试验和可靠的理论依据制定的，此类随便用药行为不仅无法达到治疗效果，往往还会造成不良后果。药量过大可能引起中毒，尤其对老人和儿童，是十分危险的；药量偏小，非但达不到治疗效果，反而贻误病情，甚至产生耐药性。因此，使用药物时，应该参照药品说明书上的规定，严格掌握用量和疗程，这样才能保证用药安全有效。
4 不按疗程服药，稍有好转立即停药或者频繁换药
疾病是否痊愈，并不是以患者自觉症状的好坏来决定的，当您感觉已经正常时，身体机能并未完全恢复正常，如果是患感染性疾病，致病菌也可能只是暂时潜伏起来，并未被清除。可见，在对待用药疗程的问题上，要相信医生，不要被主观感觉欺骗。以下几种情况，都是用药过程中需要杜绝的。①时断时续：药物发挥疗效主要取决于它在血液中恒定的浓度，如不按时服药，达不到有效浓度，对控制疾病发展不利。②疗程不足：药物治疗需要一定的时间，如细菌感染性疾病需要7-14天才可治愈。若用药两三天，症状有所缓解就停药，就可能成为慢性感染。糖尿病的治疗中，有时症状虽然消失了，但如果不查血糖，可能血糖仍高，此时若自行停药，可能会导致并发症。③突然停药。许多慢性疾病需长期坚持用药控制病情，巩固疗效，如精神病、抑郁症、糖尿病、高血压等，停药应在医师指导下逐步进行。不要擅自停药，否则会旧病复发，病情加重而危及生命。④随意换药。有些药物显示疗效需要一定的时间，如伤寒病程为4周，用药总疗程不少于2周；抗结核病药需0.5-1年，随意换药可使治疗复杂化，出现问题难以找出原因及时处理。
5 对治疗目标有不切实际的期望或盲目联合用药
得了病，大家总想通过一次治疗断根，认为长期服药就等于自己的病治不好了。这种愿望是人之常情，但也应该看到，到目前为至，除了少数能获得持久免疫的疾病外，绝大多数疾病是难以通过某种“神奇的治疗”而根治的。因此我们对疾病的康复要有一个科学的心理预期，才能避免不合理用药。还有部分患者认为将数种药物联合使用，总有一种是合适的，还可以增强疗效。实际上合用的药物越多，它们之间产生相互作用，引起不良反应的可能性越大。所以，联合用药时务必咨询医师和药师。
参 考 文 献
[1]刘晓炎，施安国.我院20xx年度门诊不合理用药处方浅析[j] .
第十七篇 试论他汀类药物对神经细胞和神经胶质细胞ABCA1基因表达的影响_药学论文
【摘要】 目的 观察他汀类药物对神经细胞和神经胶质细胞atp结合盒式转运体1(atpbinding cassette transporter 1, abca1)基因表达的影响。方法 培养人类神经细胞和神经胶质细胞，分别加入不同浓度的辛伐他汀(simvastatin)和普伐他汀(pravastatin)，孵育不同时间后分别提取细胞总rna和胞质蛋白，rtpcr观察abca1基因的表达，western blot检测abca1蛋白。结果 辛伐他汀和普伐他汀组显著降低了abca1基因和蛋白的表达，其中辛伐他汀的作用比普伐他汀明显(辛伐他汀对神经元和神经胶质细胞abca1基因表达分别降低95%和75%p<0.05)，神经元实验组比神经胶质细胞组更为敏感。结论 他汀类药物可以显著降低神经元和神经胶质细胞abca1基因和蛋白的表达，abca1的降低有可能影响细胞内胆固醇的代谢，对全面评价他汀类药物对高血脂相关基因的影响及用药安全性提供了一定的实验依据。
【关键词】 atp结合盒式转运体1;辛伐他汀;普伐他汀
abstract: objective to observe the effects of statins on atpbinding cassette transporter 1 (abca1) gene expression in neurons and astrocytes.methods primary human astrocytes and neuron cell line hcn2 were incubated with simvastatin and pravastatin at different concentrations and under different conditions. using rna isolated from the cultured cells, we performed quantitative pcr to measure the abca1 gene expression in astrocytes and neurons. the protein expression of abca1 was measured by western blot.results the two statins significantly decreased the abca1 gene and protein expressions. compared with pravastatin, simvastatin significantly reduced the expression of abca1 in neurons and astrocytes by 95% and 75%, respectively (both p<0.05). the neurons were more sensitive than astrocytes.conclusion the statins are capable of decreasing the abca1 gene and protein expressions in neurons and astrocytes, and decreased abca1 expression may affect cholesterol metaboli in cells. the results may provide an important experimental basis for comprehensive evaluation of the statins to treat hyperlipidemia.
key words: atpbinding cassette transporter 1 (abca1); simvastatin; pravastatin
他汀类药物是临床常用的一类降血脂药物[12]，其主要成分为胆固醇合成限速酶羟甲戊二酰辅酶a(hmgcoa)还原酶的抑制剂。wWW.meiword.coM辛伐他汀(simvastatin)和普伐他汀(pravastatin)已广泛应用于高血脂症的临床治疗。由于该药阻断甲羟戊酸的生化途径，不但能抑制胆固醇的合成、降低血浆ldl的水平、阻止巨噬细胞向泡沫细胞的转化，而且可以显著降低因高血脂引起的动脉粥样硬化性疾病的死亡率[3]。此外，研究表明，他汀类药物还可以升高血浆高密度脂蛋白
(high density lipoprotein, hdl)和载脂蛋白a。
atp结合盒式转运体1(atpbinding cassette transporter 1, abca1)是atp结合盒式转运蛋白之一，它以atp为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，在胆固醇逆转运(rct)和hdl生成的起始步骤中起重要作用。abca1基因错义突变所引起的杂合子型tangier疾病，就是由于apoa i所介导的胆固醇流出减少、hdlc浓度降低和颗粒直径变小而造成[4]。作为潜在的抗粥样硬化的靶点之一，上调abca1基因的表达具有重要意义。apoa i是hdl中主要的蛋白质，是细胞胆固醇逆向转运的特殊重要因素。apoa i能与磷脂、多种血浆因子及细胞膜受体结合, 可以激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lcat)，起着促进细胞内胆固醇的移出、酯化、转移、以及调节hdl代谢的作用[5]。
以往学者认为，他汀类药物可能对老年痴呆症有一定的预防作用[6]。但是，近年来有关他汀类药物可能导致老年痴呆症或者加重原有症状的报道越来越多[79]。目前，有关他汀类药物对中枢神经系统abca1基因的影响还未见报道。本实验通过观察辛伐他汀、普伐他汀对正常神经细胞和神经胶质细胞中abca1基因表达的影响，初步解释了他汀类药物有可能造成患者老年痴呆症的发生或者症状加重的原因，为进一步揭示他汀类药物的作用机制及其与神经系统退行性疾病的关系打下一定的基础。
1 材料与方法
1.1 材料 神经细胞系hcn2(crl10742)购自美国atcc公司，神经胶质细胞系为本实验室保存。辛伐他汀、普伐他汀、甲羟戊酸、fpp和ggpp均购自sigma公司。rna提取试剂盒购自美国qiagen公司。memper真核细胞膜蛋白提取试剂盒购自美国pierce公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 常规培养神经元和神经胶质细胞，分别用含有150ml/l和50ml/l胎牛血清的dmem培养基进行培养，待细胞汇合成片，胰酶消化后分别转入12孔板内，放入50ml/l co2培养箱中37℃培养观察，待细胞生长成片时，用不含血清的培养基分别配置5μmol/l的辛伐他汀、20μmol/l普伐他汀、100μmol/l甲羟戊酸、10μmol/l的fpp、10μmol/l ggpp，充分混匀。分别设立空白对照组、辛伐他汀实验组(s)、普伐他汀实验组(p)、辛伐他汀+甲羟戊酸实验组()、普伐他汀+甲羟戊酸实验组(pm)、辛伐他汀+fpp实验组(sf)、普伐他汀+fpp实验组(pf)、辛伐他汀+ggpp实验组(sg)、普伐他汀+ggpp实验组(pg)。放入培养箱继续培养48h。
1.2.2 逆转录反应 离心收集细胞，预冷pbs洗涤1次后用qiagen试剂盒提取细胞总rna。取1μg细胞总rna，5×逆转录缓冲液5μl，rnasin(40u/μl)20u，10mol/l 4×dntps 2μl，用depc处理的h2o补足至23μl。混合均匀后于70℃反应5min，加入2μl反转录酶，37℃反应1h后，90℃热灭活5min，置-20℃贮存备用。
1.2.3 荧光定量rtpcr检测abca1的表达 采用
abi pri 7700 sequence detector荧光定量pcr仪，以18s为内参。反应体系如下：吸取逆转录反应产物5μl，上、下游引物各10pmol/l，荧光探针5pmol/l，5×pcr缓冲液10μl，10mol/l 4×dntps 1μl，taq dna聚合酶1.5μl(2u/μl)，用灭菌纯水补足至50μl，在pe7000(美国abi公司)上，93℃预变性3min后按如下条件进行循环：93℃ 30s，55℃ 45s，72℃ 20s，共40个循环。设置阴性对照和阳性梯度对照，实验结果由电脑软件。引物序列如下，f：5′tggttctatgcccgcttga3′;r：5′accttagatcccccgacaaag3′。
1.2.4 western blot方法测定神经元和神经胶质细胞中abca1蛋白的变化 离心收集细胞，预冷pbs洗涤1次后，用memper真核细胞膜蛋白提取试剂盒提取细胞膜蛋白。采用biorad公司的垂直电泳装置电泳，并用半干法转膜。杂交按照kpl公司的protein detector t western blot kit说明进行。abca1一抗购自novus公司。
1.3 统计学处理 所有实验数据以±s表示，使用statistica软件(美国，statsoft inc)。采用mannwhitney u检验和t检验，p<0.05为差异有统计学意义。
宫惠琳，李 扩，张冠军，等. 他汀类药物对神经细胞和神经胶质细胞abca1基因表达的影响
2 结 果
2.1 神经元实验组rtpcr和western blot结果 他汀类药物组与实验对照组相比，abca1基因的表达降低(其中辛伐他汀降低abca1基因达95%)，两组间差异有统计学意义(p<0.05)。加入mevalonate后，可以部分减弱辛伐他汀和普伐他汀的作用。但是，ggpp组、fpp组与他汀类实验组比较无显著性差异(图1);western blot结果显示，在加入相同量的蛋白时，他汀类实验组的abca1蛋白表达显著降低(图2)。
2.2 神经胶质细胞实验组rtpcr和western blot结果
他汀类药物组与实验对照组相比，abca1基因的表达降低(其中辛伐他汀降低abca1基因75%)，
两组间差异有统计学意义(p<0.05)，但加入mevalonate、ggpp和fpp后，与他汀类实验组相比较无显著性差异(图3);western blot结果显示，在加入相同量的蛋白时，他汀类实验组abca1蛋白表达降低(图4)。
3 讨 论
他汀类药物(statins)作为一种非常有效的降胆固醇、降血脂药物已经被广泛应用于临床，总体药效评价较好。以往研究认为，该药物可以降低血脂、降低心脑血管疾病的发病率、预防老年痴呆症的发生。但近年来研究提示，长期大剂量服用该药物可能造成脑细胞暂时性或者永久性的损伤，有些患者反而出现老年痴呆症的表现[79]。这种现象日益引起人们的重视。本研究证实使用他汀类药物能显著降低神经元和胶质细胞内abca1基因的表达，引起脑内胆固醇代谢异常，进而揭示了他汀类药物有可能是引起老年痴呆症的原因。
胆固醇的逆向转运(rct)是指 hdl从肝外组织将胆固醇转运到肝脏进行代谢。通过这种机制，机体可将外周组织衰老细胞膜中的胆固醇转运到肝脏代谢并排出体外。胆固醇的逆向转运是一个由hdl介导，在胆固醇酯化酶、lcat共同作用下完成的多步骤过程[10]。
abca1是一种整合膜蛋白。abca1基因位于常染色体9q31上。它所编码的蛋白称为abca1蛋白，属于atp结合盒式转运体(atpbinding cassette transporter, abc)基因家族的一员。abca1广泛分布于人体多种组织，在胎盘、肝脏、肺、肾上腺和婴儿组织内高水平表达。在正常主动脉血管中没有发现abca1的表达，而在动脉粥样硬化的血管中则有该基因的表达[1112]。以往研究表明，肝脏和巨噬细胞abca1过表达与血浆脂质水平有密切关系，血浆胆固醇从巨噬细胞流出及血浆中hdl明显增加可大大减轻动脉粥样硬化的损伤[13]。临床研究表明，辛伐他汀和普伐他汀对大脑中载脂蛋白e(apoe)和磷脂蛋白转移蛋白(pltp)的作用有所不同：辛伐他汀可以显著降低脑脊液中pltp的活性，而普伐他汀却无此类作用;相反，普伐他汀使脑脊液中apoe水平下降明显，而辛伐他汀的作用却不明显[14]。由于血脑屏障的影响，两种他汀类药物进入血脑屏障的能力有所不同。辛伐他汀为脂溶性，较易透过血脑屏障;而普伐他汀为水溶性，透过血脑屏障较为困难。因此，本实验直接用神经元和神经胶质细胞作为研究对象，去除了血脑屏障的影响，从而更为直观地研究两种常用的他汀类药物对胆固醇逆向运输相关基因的影响。实验结果显示，去除了血脑屏障对他汀类药物的影响，辛伐他汀和普伐他汀对神经元和胶质细胞的作用有很大的不同。辛伐他汀可以显著降低神经元和胶质细胞内abca1基因的表达，尤其是对于前者，可使abca1的基因表达降低约95%;而普伐他汀对两者abca1基因表达影响较弱。另外，加入mevalonate后，在神经元中他汀类药物降低abca1基因表达的能力下降，而加入ggpp和fpp后，他汀类药物降低abca1基因表达的能力没有改变;在胶质细胞表现则有所不同，加入mevalonate、ggpp和fpp后，abca1基因的表达几乎没有改变。以上说明了他汀类药物对神经元abca1基因表达的影响比对胶质细胞更为显著，并且有可能是通过减少mevalonate的产生这一途径来实现的。研究表明，abca1基因可以促进胆固醇流出转运至血浆中形成新生hdl，从而使它成为降低胆固醇，防止动脉粥样硬化的重要因子。在本实验中，他汀类药物显著降低神经元和神经胶质细胞abca1基因的表达，对神经元和神经胶质细胞的胆固醇代谢产生严重影响，进而造成神经元和胶质细胞的变性、死亡。这是长期使用他汀类药物影响患者认知能力和记忆能力的原因之一。
本研究有助于更深入地了解该药物的作用机制及其不良反应，为进一步认识脂代谢异常与老年痴呆症的相互关系提供了一定的实验依据。在细胞学水平进一步证实了长期大剂量使用他汀类药物可能对神经系统造成的不良影响，提示长期服用他汀类药物的患者要特别注意用药类型、时间和用药剂量。
【参考文献】
[1]werner n, nickenig g, laufs u. pleiotropic effects of hmgcoa reducatese inhibitors [j]. basic res cardiol, 20xx, 97(2):106116.
[2]miida t, hirayama s, nakamura y. cholesterolindependent effects of statins and new therapeutic targets: ischemic stroke and dementia [j]. j atheroscler thromb, 20xx, 11(5):253264.
[3]auer j, berent r, eber b. lessons learned from statin trials [j]. clin cardiol, 20xx, 24(4):277280.
[4]brousseau me, eberhart gp, dupuis j, et al. cellular cholesterol efflux in heterozygotes for tangier disease is markedly reduced and correlates with highdensity lipoprotein cholesterol concentration and particle size [j]. j lipid res, 2000, 41(7):11251135.
[5]schaefer jr, schweer h, ikewaki k. metabolic basis of high density lipoproteins and apolipoprotein ai increase by hmgcoa reductase inhibition in healthy subjects and a patient with coronary artery disease [j].atherosclerosis, 1999, 144(1):177 184.
[6]kurinami h, sato n, shinohara m, et al. prevention of amyloid betainduced memory impairment by fluvastatin, associated with the decrease in amyloid beta accumulation and oxidative stress in amyloid beta injection mouse model [j]. int j mol med, 20xx, 21(5):531537.
[7]orsi a, sherman o, woldesekassie z. simvastatinassociated memory loss [j]. pharmacotherapy, 20xx, 21(6):767769.
[8]king ds, wilburn aj, wofford mr, et al. cognitive impairment associated with atorvastatin and simvastatin [j]. pharmacotherapy, 20xx, 23(12): 16631667.
[9]wagstaff lr, mitton mw, arvik bm, et al. statinassociated memory loss: ysis of 60 case reports and review of the literature [j]. pharmacotherapy, 20xx, 23(7):871880.
[10]phillips mc, gillotte kl, haynes mp. mechanis of high density lipoproteinmediated efflux of cholesterol from cell plaa membranes [j]. atherosclerosis, 1998, 137(suppl):1317.
[11]lawn rm, wade dp, couse tl, et al. localization of human atpbinding cassette transporter 1 (abca1) in normal and atherosclerotic tissues [j]. arteroscler thromb vasc biol, 20xx, 21(3):378385.
[12]langmann t, klucken j, reil m, et al. molecular cloning of the human atpbinding cassette transporter 1 (habca1): evidence for steroldependent regulation in macrophages [j]. biochem biophys res commun, 1999, 257(1):2933.
[13]oram jf, heinecke jw. atpbinding cassette transporter a1: a cell cholesterol exporter that protects against cardiovascular disease [j]. physiol rev, 20xx, 85(4):13431352.
[14]vuletic s, riekse rg, marcovina . statins of different brain penetrability differentially affect csf pltp activity [j]. dement geriatr cogn disord, 20xx, 22(56):392398.
第十八篇 医院静脉药物配置中心信息系统的应用刍议_临床医学论文
关键词：静脉药物配置 信息系统
静脉药物配置中心(pharmacy intravenous admixture service,pivas),是指在符合国际标准、依据药物特性设计的操作环境下,受过培训的药技人员严格按照操作程序进行包括全静脉营养液、细胞毒性药物和抗生素等药物配置,为临床医疗提供优质服务的集临床与科研为一体的机构。
pivas有着传统药物配置方式不可比拟的优势。建立pivas是医院发展的一种趋势,而pivas中的患者信息和药物信息都来自于医院的信息系统。因此,利用计算机网络来管理pivas成为建立pivas初期的工作关键所在。我院于20xx年着手建立pivas,并开发了“静脉药物配置中心信息系统”,经过近半年的调研、开发和测试,该系统现已顺利应用于我院静脉药物配置中心的业务开展和管理。现将我院pivas信息系统开发和应用的情况介绍如下。
1 系统运行环境
系统的设计采用客户机/服务器(c/s)的网络体系结构,服务器采用windows20xx,客户端采用windows2000/xp,数据采用oracl e9i,前台开发工具采用powerbuilder8.0。
2 工作流程
传统的医院静脉药物配置流程(见图1)是由病区药房摆药,病区科室取药后再进行配制,打印用药单。这种方式是目前医院通用的配药流程,其药品及工作场所都集中在病区,易造成药品配送诸多瓶颈特别是药品大量储存在科室。www.meiword.cOm
我院建立pivas后的新配药流程(见图2)后,病区药房摆药之后,由配制中心排药,然后进行配制,打印用药单,然后再根据用药批次把药品连同用药单送到病区科室。这种新型的静脉药物配置流程很好地避免了传统静脉药物配置的弊端,为医院静脉药物配置的准确和高效提供了物质制度保障。
3 系统功能
pivas信息系统主要由4个功能模块和1个嵌套软件组成。4个功能模块包括: ①医嘱管理; ②库存管理; ③查询管理; ④统计管理。1个嵌套软件即合理用药软件系统。
3.1 医嘱管理
3.1.1 审核处理:病区医生开出的医嘱由护士录入,医嘱录入时选择接收科室为病区中心药房,并选择是否代配,输入批次及数量,说明是第几批送(每日分5批次配送)及所送的数量,医嘱核对后提交,即自动发送至病区中心药房。病区中心药房的药师对各个病区提交的医嘱进行审核,若审核过程中发现有问题,则立即与病区取得联系,更改后再重新录入。审核通过的医嘱通过信息系统传送至静脉药物配置中心,进入摆药处理系统。
3.1.2 摆药处理:病区中心药房选择摆药条件:长期代配药品、临时代配药品或是全部代配药品进行摆药,扣药品费用。在住院药品配送管理窗口中扣完费后的药品按批次、针剂类别(营养、普通、肿瘤)自动分开,然后分批次打印输液标签和配送单,药师将输液标签粘贴在输液袋上,再分别送到不同的配药间进行配药,经排药、核对、加药、成品核对以及核实科室批次用药总量后,将药袋打包,由工人送往各病区,由病区护士接收核对,无误后进行临床给药。
3.1.3 退药处理:由于医患等多方面的主、客观原因,使得退药现象普遍存在于配药流程中。医生根据病人病情发展需要修改医嘱退药时,由护士发出申请,配置中心确认在药品未冲配加药前,在住院药品配送管理窗口中开退药单进行退药、退费。如果药品已冲配加药,一般不允许退药。
3.2 库存管理
3.2.1 药品请领与入库处理:病区中心药房与门诊药房一样,属二级库。向药库请领药品时,可通过药品请领操作,手工录入形成药品请领单,或根据库存设定的高、低及实际库存量,可自动形成药品请领单,修改请领数量即可。待药品实物与请领单核对后,进行入库处理。
3.2.2 调拨入库与出库:与其它药房之间也可进行药品的相互调拨。
3.2.3 盘点处理与盘点录入:用于每季度一次的盘点工作,可根据盘点盈亏情况,为下一步如何加强药品管理提供依据。
3.2.4 其他:如库存预警限设置,可提醒工作人员及时请领药品。
3.3 查询管理
①库存查询:查询药品的库存情况; ②药典查询:查询各种药品的药典; ③出入库查询:查询药品的出入库情况; ④发药、退药查询:查询医嘱发药及退药的情况; ⑤病人费用明细查询; ⑥效期查询:可设定查询截止日期,系统自动统计所有库存药品中在指定日期内到期的药品; ⑦价格查询:查询各种药品的价格。
3.4 统计管理
①药品明细账:记录、打印输出药品的出入库明细账; ②科室收入核算:可统计、打印指定日期内的本科室执行的所有收入核算表以及明细表等; ③药师工作量统计。
3.5 合理用药软件系统
我院在临床工作站录入医嘱模块和pivas工作站配药审核模块中嵌入了上海大通合理用药软件系统,实现了对医嘱配伍合理性的自动审查,并提供静脉用药相容性及配伍稳定性审查信息。对静脉用药配伍的合理性进行在线审查,可准确、及时发现静脉用药中潜在的药物配伍问题,从而避免用药不良事件发生。
4 pivas信息系统的应用的意义
静脉药物配置中心信息系统的开发和应用是一项系统工程,涉及医、药、护三方面多部门和不同用户的相互配合。静脉药物配置中心信息系统的合理有效的使用,对医院医药管理全局具有重要意义。
首先,静脉药物配置中心信息系统的应用大大提高了工作效率。它为医护人员提供了及时准确的用药配药数据,减少了工作人员的手工操作。同时,静脉药物配置中心信息系统为临床药学服务提供了良好的工作平台,提升了临床药学服务水平。
其次,静脉药物配置中心信息系统的应用大大提高了工作准确率。静脉药物配置中心信息系统在医生与药师之间建立了良好的电子沟通渠道,加强了药师对临床用药的监管力度,使病人的用药更加合理,杜绝药品配伍禁忌的出现。另外,由于临床护士不再需要进行静脉药物的配置,减少了护士的非护理时间,可杜绝护士站手工直接配药出错的情况。
再次,静脉药物配置中心信息系统的应用可有效降低医疗成本。静脉药物配置中心通过集中配置,可对“大规格小剂量”药品做到合理分享、优化组合,有效降低医疗成本,减少药品浪费,减轻病人药费负担。
第十九篇 模拟病人在《西医诊断学》教学中的应用_医学论文
西医诊断学是关于诊断疾病所应用到的理论、知识和技能的临床课程。在讲授中，临床基本技能是医学生必须掌握的基本功，也是医学院校教学的重点内容之一。
但是，在目前，医学生很少能参与临床实践，原因是由于缺乏足够多的典型病例；还有就是部分病人不愿意配合见习医生，因其肯能带来不适或伤害。所以，利用模拟病人进行教学显得很有必要，可以弥补病人的不足，增加学生的实践次数，增强其学习积极性、主动性，也可以锻炼医学生与患者及其家属的沟通能力，这样有助于改善教学效果。
1 应用模拟病人的必要性
我国医学院的招生规模多数在扩大，招生数量不断增多，导致了教学资源的相对不足；其次，患者的自我保护意识在增强，也为临床见习、实习增添了难度。也由于学生较多，患者只会配合少数医学生的操作，而其他多数学生只能旁观。如见习心脏体征时，由于学生人多，每人的听诊时间不长，很难达到满意效果。另外，随着医疗法规的健全以及维权意识的不断提高，学生所致的事故均由带教医师承担责任。因此，老师大多只示范操作，让学生观摩，学生的临床实践机会很少[1]。
2 模拟病人的定义
模拟病人即标准化病人（standardized patients，sp），指经过系统培训后能准确表现病人的实际临床问题的常人或病人。另外，电子标准化病人的应用也较广泛[2]。
模拟病人的应用于问诊与体格检查，比如常见的心脏杂音、肺部啰音以及肝脾肿大的体征。www.meiword.CoM现就模拟病人在问诊和检体中的应用分述如下。
3 模拟病人在问诊中的应用
问诊是指医务人员通过与病人及有关人员交谈，详细了解疾病的发生、发展、既往健康状况等病史资料的过程，是诊断疾病的第一步，也是医学生必须掌握的。在以往的教学中，学生所接触到的只是“现病史、主诉”等概念，而对问诊的技巧、如何进行有效的医患沟通缺乏系统的训练。所以，在实验课的教学中，可以模拟实际的临床情景，将学生分成多个小组，让他们分别对模拟病人进行问诊练习，这样有助于学生克服紧张的心理，并且可逐步实现从学生过渡到医生的角色。通过科学、有效的训练使学生掌握问诊的内容、方法和技巧，同时可以培养和提高学生的交流能力、语言表达能力和逻辑思维能力。
4 模拟病人在体格检查中的应用
用模拟病人示范正常或异常体征，而电子标准化病人则只用于心肺听诊、腹部的体征。电子标准化病人不仅可以模拟典型体征，而且又可供学生反复学习实践。临床上的多种心脏杂音、奔马律、心音的异常变化、肺脏的病理性呼吸音、干湿性啰音听诊以及肝脾肿大等表现，都能被模仿出来。腹部触诊重点演示肝脾等器官的正确触诊手法[3]。
5 电子标准化病人用于考试的优势
利用电子标准化病人考核更便于控制考核的难度，能使临床技能考核标准统一，从而保证了成绩的客观、公平、公正。具体操作是：由计算机题库随机生成试卷。先由教师放音，考生听到声音后从备选答案中选出正确选项，每道题可以重复听一次。这样的考核不仅可了解学生对临床技能的掌握情况，同时，也能促进基本技能的练习和提高。这与过去心肺听诊、腹部触诊等临床技能只能进行理论考试是不同的[4]。
6 模拟病人的使用效果
教师不仅要教授理论知识，而且要配合操作演示，这样才能使所讲内容形象、易懂，增强学生的学习兴趣，提高学生的实践水平。模拟病人为学生提供了大量的练习机会，帮助学生理解、掌握基础知识。这为他们适应以后的临床工作夯实了基础。
7 问题
电子标准化病人具有典型的体征，可供多次实践，能增加学生学习的兴趣。缺点是不能完全替代临床患者。因为电子标准化病人不可能与人交流。另外，电子标准化病人尽管具备了多种临床表现，但与实际仍有不同，如肝脾质地等。而在临床教学中，教师不但要帮助学生掌握阳性体征的特点，还要引导学生与病人交流，培养学生的临床思维能力[5～6]。因此，诊断学教师也不能仅靠标准化病人进行教学，而只可把它作为一种重要的教学辅助设备来使用[7]。
第二十篇 20xx～20xx年凌云县医疗机构法定传染病漏报调查_临床医学论文
关于医疗机构法定传染病漏报调查已有许多文献报道，为了进一步提高和规范县、乡医疗机构疫情报告管理水平,根据《传染病防治法》的有关要求，凌云县每年都组织开展县、乡医疗机构法定传染病漏报调查，现将20xx～20xx年凌云县县、乡医疗机构法定传染病漏报调查情况报告如下。
材料与方法
1.调查对象
凌云县共调查十个医疗卫生机构。县直医疗卫生机构2个，乡(镇)卫生院8个。
2.调查内容
县、乡各医疗机构法定传染病报告管理情况和疫情资料管理、疫情的报告登记制度及执行情况。
3.调查方法
按照《全国法定传染病漏报调查方案》的要求，对县、乡各医疗单位20xx～20xx年1～9月份登记的全部门诊日志（内、儿、急诊、呼吸、皮肤性病等科）、全部出入院登记（内、儿、传染科）和化验室登记薄进行全面检查，将被查出的传染病病例（包括疑似病例和确诊病例）和化验室传染病确诊阳性结果的病例（病种包括病毒性肝炎、甲肝、乙肝、痢疾、淋病、梅毒）与该院传染病登记本核对，同时登录中国疾病预防控制信息系统查对，凡没有排除的或网上没有报告的病例均属于漏报病例。www.meiword.Com
4.统计学处理
数据统计采用卡方检验，p＜0.05有统计学意义。
结 果
1.疫情报告管理情况
各医疗机构均设有疫情管理领导班子和保健科,有专人负责疫情登记、报告、统计和自查等工作,制订有较完善的疫情管理制度及保健科工作规范等。
2.漏报情况
20xx～20xx年共查出传染病447例，漏报180例，漏报率为40.27%，其中20xx年和20xx年的漏报率分别为43.55%和36.18%，年度漏报情况比较无显著性差异(χ2=2.49，p＞0.05)，漏报率相当。见表1。表1 20xx～20xx年凌云县医疗机构法定传染病漏报情况（略）
3.各种传染病漏报情况
本次调查中没有发现甲类传染病，查出乙类传染病9种，漏报率为29.41%，丙类传染病4种，漏报率为49.38%。各类传染病中，漏报率居前5位的分别是：第1位是梅毒（100.00%），第2位为感染性腹泻（63.24%），第3位为出血性结膜炎（51.46%），第4位为风疹（43.75%），第5位为病毒性肝炎（40.00%）。见表2。表2 20xx～20xx年凌云县医疗机构法定传染病漏报情况（略）
4.不同级别医疗机构漏报情况
统计结果显示县级医疗机构漏报率为49.22%，乡级漏报率为36.68%，两者比较有显著性差异(χ2=5.97，p＜0.05)，县级漏报率较乡级高；报告及时率县级为100%，乡级为70.29%，两者比较有非常显著性差异（χ2=23.23，p＜0.01），县级报告较乡级及时。见表3。表3 20xx～20xx年凌云县医疗机构法定传染病漏报情况（略）
讨 论
调查结果表明，凌云县医疗机构法定传染病两年共查出447例，漏报率为40.27%，高于广西医疗机构法定传染病漏报率的13.20%［1］，也高于20xx年全国250家医疗机构平均漏报率的23.14%［2］。从漏报的病种看，主要是乙类传染病梅毒、病毒性肝炎及丙类传染病的感染性腹泻、出血性结膜炎和流行性腮腺炎，与刘丽华等报告［3］柳州市法定传染病漏报的病种相一致。漏报比较严重的是梅毒、病毒性肝炎，前者为检验室检验发现，检验室检验员根本不知道需要报告疫情，而检验室检验员与临床医生又沟通不够而造成漏报。后者是乡（镇）卫生院临床医生法制观念淡薄所致。感染性腹泻、出血性结膜炎、风疹、流行性腮腺炎、细菌性痢疾、肺结核、乙型肝炎、甲型肝炎等，漏报的主要有3个方面原因：①感染性腹泻、出血性结膜炎、风疹、流行性腮腺炎是按照丙类管理的传染病，临床比较常见，医生意识淡薄，认为不足为奇而不报。②病毒性肝炎、肺结核为慢性传染病，存在同一病人反复就诊的现象，加上门诊病人较多，病人流动量大，易被临床医生所忽视。③乙型肝炎、甲型肝炎、细菌性痢疾主要是检验室与门诊医生相互之间没有衔接好，门诊医生给患者开具检验单后，患者从检验室直接将检验阳性结果带走，而检验室也未将阳性结果及时反馈给门诊医生造成漏报。
从县、乡医疗机构漏报情况看, 乡（镇）卫生院传染病漏报情况反而少于个别县直医疗卫生单位，主要是这些单位的领导比较重视传染病疫情报告管理工作，有健全的传染病管理制度，并落实到位，有熟悉业务的专业人员负责传染病疫情报告管理。漏报率较高的县直医疗卫生单位由于传染病管理报告制度不够完善，落实不到位，临床医生对传染病报告管理不重视，领导督促检查不到位，加上传染病管理人员身兼数职，没有足够的时间和精力去抓传染病报告和开展传染病相关知识的学习。为此，今后必须加强医务人员传染病防治相关知识的学习和传染病防治法的普及，提高其对法定传染病的报告意识。
通过传染病漏报的调查，我们认为，为搞好县一级法定传染病的疫情报告工作，各医疗卫生单位应建立健全门诊日志、出入院登记和检验室登记的管理制度，统一制订各种表格，并认真做好各项登记工作，同时应建立检验室与门诊沟通制度，使检验室传染病阳性结果能及时反馈到门诊临床医生。卫生行政部门应定期组织卫生监督机构和疾控机构联合起来对本辖区医疗机构传染病疫情报告管理工作的监督检查,加大执法力度,对违反传染病防治法的行为(迟报、漏报、不报)进行处罚和责任追究，确保《传染病防治法》的贯彻执行。
【参考文献】
［1］黄丽华，林桂新，卓家同，等.广西医疗机构法定传染病管理及报告质量情况调查［j］.疾病控制杂志，20xx，12(2)：177-179.
［2］施小明，马家奇，王丽萍，等.20xx年全国医疗机构法定传染病漏报情况调查［j］.疾病监测，20xx，21(9)：493-494.
［3］刘丽华，钟柳青，殷 凯.20xx年广西柳州市法定传染病报告质量调查［j］.疾病监测，20xx，23(7)：454-456.
作者：杨秀卿，刘懿仪 作者单位：广西凌云县疾病预防控制中心，广西凌云 533100
文章地址：www.myenblog.com/a/286043.html